[发明专利]一种日本花柏醇的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种日本花柏醇的制备方法。

背景技术

日本花柏醇为二萜类成分，CAS号24035-36-7，分子量为C20H30O2，分子量为302.46。分子结构式：

日本花柏醇对稻胚细胞霉有抗霉菌活性，在浓度为100μg/mL时，抑制率为97%；日本花柏醇能治皮肤病，含有本品的药物和化妆品可治疗痤疮和头皮屑；可作为除臭剂，可消除口臭、脚臭和狐臭等；日本花柏醇具有抗氧化作用，比VE强。

通过文献检索，日本花柏醇制备方法多采用有机试剂提取及硅胶柱分离，此类方法提取效率低，纯化过程复杂，产品收率低。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高效、操作简便的日本花柏醇的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种日本花柏醇的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取日本花柏的叶粉碎20-80目，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为1-5ml/min/g原料，同时通入甲醇溶液做夹带剂，流量为1-4ml/min/g，压力15-25Mpa，萃取1-3h，解析得萃取物；

2）上述萃取物用热水溶解，加入大孔树脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩，浓缩液加入聚酰胺树脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用90%甲醇溶液重结晶即得。

 所述步骤2）中大孔树脂可选：AB-8、D101、HZ816和HPD100中的一种。

所述步骤2）中乙醇溶液梯度洗脱为：5-9倍柱体积30-50%乙醇溶液洗脱杂质，5-10倍柱体积60-90%乙醇溶液洗脱有效成分。

采用上述技术方案生产车轴草素，提取效率高，工艺简单易操作，而且对环境友好，易于实现工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

取干燥的日本花柏的叶5kg粉碎80目，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为3ml/min/g原料，同时通入甲醇溶液做夹带剂，流量为3ml/min//g，在压力25Mpa，萃取1.5h，解析得萃取物用热水溶解，加入AB-8大孔树脂中吸附，先用5倍柱体积30%乙醇溶液洗脱杂质，再7倍柱体积60%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液浓缩，浓缩液加入聚酰胺树脂中吸附，先用6倍柱体积50%乙醇溶液洗脱杂质，再7倍柱体积70%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液浓缩，洗脱液浓缩结晶，结晶物滤出再用90%甲醇溶液重结晶，得日本花柏醇533mg，经HPLC检测，含量98.5%。

实施例2：

取干燥的日本花柏叶，5kg粉碎40目，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为2ml/min/g原料，同时通入甲醇溶液做夹带剂，流量为2ml/min/g，在压力20Mpa，萃取2h，解析得萃取物用热水溶解，加入D101大孔树脂中吸附，先用5倍柱体积40%乙醇溶液洗脱杂质，再7倍柱体积70%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液浓缩，浓缩液加入聚酰胺树脂中吸附，先用5倍柱体积40%乙醇溶液洗脱杂质，再8倍柱体积65%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液浓缩，洗脱液浓缩结晶，结晶物滤出再用90%甲醇溶液重结晶，得日本花柏醇434mg，经HPLC检测，含量97.2%。

实施例3：

取干燥的日本花柏叶，5kg粉碎80目，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为1ml/min/g原料，同时通入甲醇溶液做夹带剂，流量为3ml/min/g，在压力15Mpa，萃取3h，解析得萃取物用热水溶解，加入HZ816大孔树脂中吸附，先用5倍柱体积45%乙醇溶液洗脱杂质，再5倍柱体积80%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液浓缩，浓缩液加入聚酰胺树脂中吸附，先用9倍柱体积40%乙醇溶液洗脱杂质，再10倍柱体积60%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液浓缩，洗脱液浓缩结晶，结晶物滤出再用90%甲醇溶液重结晶，得日本花柏醇579mg，经HPLC检测，含量97.7%。

实施例4：

取干燥的日本花柏叶5kg，粉碎20目，置于CO2超临界萃取罐中萃取，通入液态CO2，流量为2ml/min/g原料，同时通入甲醇溶液做夹带剂，流量为1ml/min/g，在压力25Mpa，萃取3h，解析得萃取物用热水溶解，加入HPD100大孔树脂中吸附，先用5倍柱体积40%乙醇溶液洗脱杂质，再6倍柱体积60%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液浓缩，浓缩液加入聚酰胺树脂中吸附，先用6倍柱体积450%乙醇溶液洗脱杂质，再7倍柱体积65%乙醇溶液洗脱有效成分，洗脱液浓缩，洗脱液浓缩结晶，结晶物滤出再用90%甲醇溶液重结晶，得日本花柏醇581mg，经HPLC检测，含量98.1%。