[发明专利]一种区分鉴定大白菜、结球甘蓝FLCs基因的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种区分鉴定大白菜、结球甘蓝FLCs基因的方法，属于分子遗传学理论应用与育种技术领域。 

背景技术

结球甘蓝为绿体春化型，通常在7~9片叶或茎粗达到6mm时才能感受低温，接受6~8周持续低温才能完成春化诱导开花。大白菜为种子春化型，萌动的种子即可感受低温诱导开花，其春化温度一般也比结球甘蓝高。拟南芥研究结果显示，对春化需求的不同很大程度上取决于FLC（FLOWERING LOCUS C）基因，同时很多控制开花的基因功能也都是通过调节FLC来实现的，是植物开花研究中的热点。FLC在拟南芥中只有1个拷贝，即AtFLC，位于第5条染色体上。Schranz等（2002）在白菜中克隆到4个AtFLC同源基因：BrFLC1、BrFLC2、BrFLC3和BrFLC5，在甘蓝中分离到3个AtFLC同源基因：BoFLC1、BoFLC2和BoFLC5。之后Lin等（2005）在甘蓝中分离得到BoFLC3-2和BoFLC4-1。根据www.ncbi.nlm.nih.gov和www.brassicadb.org/brad/上已公布的白菜和甘蓝FLCs基因序列，利用DNAMAN比对与MEGA5.0邻近结合法比较系统发育分析， 结果表明BoFLC2与BoFLC4-1的同源性非常高。Okazaki等（2007）在甘蓝中分离得到BoFLC2，其结果表明：BoFLC2与BoFLC4-1的同源性高达98%，推测二者的归类不同是由于Lin等参照了有限的氨基酸序列信息所致。因此本发明开展了大白菜、结球甘蓝 FLC1、FLC2、FLC3、FLC5的区分鉴定。 

目前在白菜和甘蓝中分别开展FLCs基因的研究报道很多，但同时开展大白菜和结球甘蓝FLCs同源基因区分鉴定的研究还鲜有报道。仅姚远颋等（2009）以白菜型油菜、甘蓝为材料，利用基因中某碱基差异设计SNP引物对来自白菜型油菜和甘蓝的FLC1与FLC3基因进行了分型（即区分鉴定白菜型油菜和甘蓝的FLC），每一个基因的分型需要2对引物，没有涉及这一基因家族其他基因。将该SNP特异引物应用到本研究试验材料的FLCs鉴别，其中3对引物（FW1-RN2、F3-RC3、F3-RA3）未能得到扩增产物，1对引物（FN2-RW1）扩增得到3500bp左右的非目的扩增产物，即不能用于区分大白菜与结球甘蓝FLCs基因。 

发明内容

本发明以我国广泛种植的不同类型大白菜和结球甘蓝为试材，利用FLCs外显子4的多态性区设计正向引物，在外显子7保守区设计反向引物，首次实现了对大白菜和结球甘蓝BrFLC1、BrFLC2、BrFLC3、BrFLC5、BoFLC1、BoFLC2、BoFLC3和BoFLC5基因的全面、准确鉴定。为进一步探究大白菜（种子春化）与结球甘蓝（绿体春化）春化机制，深入研究每个FLC基因对抽薹开花的作用，以及大白菜与结球甘蓝FLCs同源基因的互作提供技术支撑，为近缘种属同源基因研究提供新思路。 

本发明的基本原理是：利用白菜与甘蓝FLCs基因序列，在多态性和保守性区段分别设计正、反向引物，根据扩增产物的大小差异，达到区分鉴定大白菜、结球甘蓝FLCs基因的目的。 

本发明的特点是：（1）全面性。区分鉴定了大白菜与结球甘蓝8个同源基因，即BrFLC1、BrFLC2、BrFLC3、BrFLC5、BoFLC1、BoFLC2、BoFLC3和BoFLC5；（2）简便性。利用一对引物即可以区分大白菜和结球甘蓝的相应FLC基因；（3）广谱性。本发明采用多个类型大白菜和多个类型结球甘蓝为材料，筛选出区分大白菜和结球甘蓝各FLC基因的特异引物，体现了广泛的适用性。 

本发明通过以下步骤完成：