[发明专利]建立革兰氏阳性菌与阴性菌混合感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属实验动物模型领域，具体涉及一种建立革兰氏阳性菌与阴性菌混合感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的方法及试剂盒。

背景技术

随着我国的糖尿病发病率急剧升高，糖尿病溃疡患者的数量也随之增加，在动物整体水平建立真实模拟糖尿病溃疡的疾病模型，是探讨糖尿病溃疡发病机制及临床前药效学评价等医学研究的必要条件，具有十分重要的科学意义和临床意义。

目前糖尿病足溃疡动物模型多为诱发性动物模型。文献研究结果显示，现有糖尿病足溃疡的动物模型多模拟单一发病因素（如外周动脉病变，神经病变或感染），同时动物模型与实际模拟相似程度与研究目的存在较大的差距，而实际上二种以上因素的复合致病在临床上更为普遍。因此，多因素复合的糖尿病足溃疡动物模型更能模拟临床实际的发病情况。

因此，根据临床实际的发病特征及病理改变建立模拟程度较高的动物模型对于糖尿病溃疡的发病机制的研究及相关的手术，药物等干预的疗效评价具有重要的实际意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种可重复性高，稳定，疾病模拟程度高，便于评价的革兰氏阳性菌与阴性菌混合感染的糖尿病足溃疡大鼠实验动物模型的建立方法。

本发明要解决的技术问题之二是提供一种用于建立革兰氏阳性菌与阴性菌混合感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的试剂盒。

本发明要解决的技术问题之三是提供一种上述试剂盒在建立革兰氏阳性菌与阴性菌混合感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用。

在本发明的一方面，提供一种建立革兰氏阳性菌与阴性菌混合感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的方法，包括下述步骤：大鼠经高脂饲料喂养8周后，注射链脲佐菌素，制成糖尿病模型，稳定后在大鼠皮肤上制成深II度烫伤，3天后，烫伤处注射革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌混悬液。

作为优选的技术方案，所述革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌菌混悬液为：浓度为1×10⁸ufc·ml^-1的金黄色葡萄球菌ATCC25923与大肠埃希菌ATCC285922等比例混合液。

作为优选的技术方案，所述注射革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌混悬液24小时后取创面脓液做病原微生物及药敏检测，用于确定创面细菌定植。

作为优选的技术方案，所述注射链脲佐菌素具体为：1.5％链脲佐菌素溶解于PH值4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液在大鼠左下腹注射。

作为优选的技术方案，所述高脂饲料包含以下重量百分比的组分：基础饲料73％，猪油20％，奶粉2％，胆固醇1％，蔗糖4％；所述基础饲料由以下重量百分比的组分组成：大麦15%，小麦31%，玉米15%，麸皮15%,鱼粉6%，豆粕、油和盐共18%。

在本发明的另一方面，提供一种用于建立革兰氏阳性菌与阴性菌混合感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型的试剂盒，该试剂盒包括革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌混悬液。

作为优选的技术方案，所述革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌混悬液是浓度为1×10⁸ufc·ml^-1的金黄色葡萄球菌ATCC25923与大肠埃希菌ATCC25922等比例混合液。

作为优选的技术方案，所述试剂盒还包括1.5％链脲佐菌素，PH值4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，PBS液，注射器，无菌拭子，无菌手套，安尔碘液（用于遗弃菌液灭活）。

此外，在本发明的另一方面，提供上述试剂盒在建立革兰氏阳性菌与阴性菌混合感染的糖尿病足溃疡大鼠实验模型中的应用。

本发明实验动物模型属于复合制备糖尿病足溃疡大鼠模型，模型制备分为三个阶段，各有其具体的制备方法及评价方法，具体分为糖尿病模型制备阶段，溃疡模型制备阶段，复合感染模型制备阶段。

本发明的糖尿病溃疡实验动物模型通过对药物干预后生化指标的变化的检测，结果表明，本模型具有糖尿病足溃疡伴多菌群感染的特征，创面感染脓腐明显，溃疡创面愈合时间较长，对药物反应敏感等特点。

附图说明

图1是本发明实施例1中大鼠烫伤后的病理切片HE染色示意图。

具体实施方式

本发明的模型制备及验证通过下述实验证实：

实施例1