[发明专利]一种楤木悬浮细胞培养的方法

权利要求书

1.一种楤木悬浮细胞培养的方法，包括无菌叶片的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的增殖，悬浮细胞的培养和优化，其主要步骤如下：

（1）按照常规植物组织培养的消毒方法对楤木叶进行消毒处理，获得无菌的楤木叶片；

（2）将步骤（1）所获得的楤木无菌叶片接种到愈伤组织诱导培养基MS+NAA 0.5mg/L+IBA 3mg/L中进行愈伤组织诱导；

（3）将步骤（2）诱导出来的楤木愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基MS+6-BA 1-2mg/L+2，4-D 0.2-0.5 mg/L中进行增殖培养；

（4）将步骤（3）增殖过的楤木愈伤组织接种到MS+KT0.2-0.4mg/L+TDZ0.05-0.2mg/L培养基中振荡培养，继代培养3代，得到楤木悬浮细胞。

2.按照权利要求1所述的一种楤木悬浮细胞培养的方法，其特征在于：步骤中所述无菌的楤木叶片按下列消毒方法得到：将楤木叶片用毛刷洗去表面污垢，用漂白粉浸泡三分钟，流水冲洗25min，超净工作台上氯化汞消毒处理8min，无菌水冲洗4-5次，然后用无菌的滤纸吸去叶片表面的水分。

3.按照权利要求1所述的一种楤木悬浮细胞培养的方法，其特征在于：步骤中楤木愈伤组织诱导的条件为温度25℃，暗室培养，湿度30%~60%。

4.按照权利要求1所述的一种楤木悬浮细胞培养的方法，其特征在于：步骤中楤木愈伤组织增殖的条件为温度25℃，光照强度1000-2000lx，光期10h，暗期14h，湿度30%~60%。

5.按照权利要求1所述的一种楤木悬浮细胞培养的方法，其特征在于：步骤中愈伤组织悬浮细胞的培养，每50ml悬浮细胞添加100ml培养液，接种于250ml锥形瓶中进行悬浮振荡培养。