[发明专利]HPLC法分析蛹虫草子实体和残基中有效物含量的方法

权利要求书

1.一种HPLC法分析蛹虫草子实体和其固体培养残基中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）腺苷和虫草素标准溶液的制备和蛹虫草子实体及其固体培养残基供试溶液制备；

腺苷和虫草素标准溶液制备：称取干燥至恒重的腺苷及虫草素标准品置于容器中，用水溶解并定容作为标准储备液，加超纯水将所述标准储备液稀释成若干不同浓度的腺苷和虫草素标准溶液；

分别制备蛹虫草子实体及其固体培养残基供试溶液：将蛹虫草子实体烘干，经粉碎机粉碎后过筛，精确称取干燥至恒重的蛹虫草子实体粉末样品，加入提取液进行提取，提取结束后分离得上清液，即为蛹虫草子实体供试溶液；将蛹虫草固体培养残基烘干，经粉碎机粉碎后过筛，精确称取干燥至恒重的蛹虫草固体培养残基粉末样品，加入提取液进行提取，提取结束后分离得上清液，即为蛹虫草固体培养残基供试溶液；

（2）分别精密吸取腺苷和虫草素标准溶液及蛹虫草子实体供试溶液，过滤后注入进样小瓶，测定蛹虫草子实体供试溶液应呈现与腺苷和虫草素标准溶液色谱保留时间相同的色谱峰；分别精密吸取腺苷和虫草素标准溶液及蛹虫草固体培养残基供试溶液，过滤后注入进样小瓶，测定蛹虫草固体培养残基供试溶液应呈现与腺苷虫草素标准溶液色谱保留时间相同的色谱峰；测试的色谱条件如下：色谱柱为XBridgeTM C₁₈(5 μm, 4.6 x 150 mm)；流动相：甲醇、超纯水，体积比为10:90；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μL，自动进样；柱温：30 ℃；检测波长：254 nm。

2.如权利要求1所述的HPLC法分析蛹虫草子实体和其固体培养残基中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述腺苷和虫草素标准溶液制备方法为：精确称取干燥至恒重的腺苷及虫草素标准品各4mg，准确到0.0001 g，于50 ml容量瓶中用水溶解并定容作为标准储备液，浓度记为80 μg/ml；然后将所述标准储备液用超纯水稀释成2 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml的腺苷和虫草素标准溶液。

3.如权利要求1所述的HPLC法分析蛹虫草子实体和其固体培养残基中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述蛹虫草子实体及其残基供试溶液制备方法为：将蛹虫草子实体置于40 ℃烘干箱烘干，经粉碎机粉碎后过200目筛，精确称取干燥至恒重的蛹虫草子实体粉末样品0.25 g于50 ml离心管中，加入25 ml提取液进行超声提取，提取结束后将离心管置于20 ℃、5000 r/min的离心机中离心15 min，吸取上清液1 ml，经0.45 μm水相微孔滤膜过滤；将蛹虫草固体培养残基置于40 ℃烘干箱烘干，经粉碎机粉碎后过200目筛，精确称取干燥至恒重的蛹虫草固体培养残基粉末样品0.25 g于50 ml离心管中，加入25 ml提取液进行超声提取，提取结束后将离心管置于20 ℃、5000 r/min的离心机中离心15 min，吸取上清液1 ml，经0.45 μm水相微孔滤膜过滤。

4.如权利要求3所述的HPLC法分析蛹虫草子实体和其固体培养残基中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述提取液为水。

5.如权利要求4所述的HPLC法分析蛹虫草子实体和其固体培养残基中腺苷和虫草素含量的方法，其特征在于，所述超声提取在25℃条件下提取40分钟，提取一次。