[发明专利]一种高抗TuMV的RNA和编码该RNA的RNAi载体

说明书

技术领域

本发明属于植物抗病毒基因工程领域，具体涉及一种高抗TuMV的RNA和编码该RNA的RNAi载体。

背景技术

芜菁花叶病毒(Turnip Mosaic Virus,TuMV)属马铃薯Y病毒科（Potyviridae）、马铃薯Y病毒属（Potyviruse）。TuMV寄主范围十分广泛，能够侵染43科156属318种植物。TuMV是危害十字花科作物最为严重的病毒。感染病毒后的作物还容易感染霜霉病和软腐病，造成复合侵染，直接影响到产量和商品价值。

油菜是我国主要的油料作物，芜菁花叶病毒病是油菜的重要病害之一。在我国长江中下游，油菜因病毒病减产一般达20-30%，大流行年达50%左右。感病油菜不仅产量降低，而且产油率和种子萌芽率也明显降低。另据调查我国白菜因TuMV危害平均每年造成5-10%的产量损失，病害严重的地块几乎绝收。

TuMV主要是靠蚜虫以非持久性的方式传播，至少有89种蚜虫可传播该病毒。而采用杀虫剂不可能很快杀死全部的蚜虫以阻止病毒的传播，仅靠杀虫剂杀蚜防治病毒病的效果不明显，还易造成环境污染。因此寻求新的抗病方法成为了一项迫切的任务。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种高抗TuMV的RNA和编码该RNA的RNAi载体。

本发明提供的一种RNA，具有下述核苷酸序列之一：

1）序列表中的SEQ ID №.2所示的核苷酸序列；

2）与1）限定的RNA序列具有90％以上同源性，且具有相同功能的RNA序列；具体的，所述同源性为95%以上；再具体的为96%以上；再具体的为97%以上；再具体的为98%以上；再具体的为99%以上。

所述具有相同功能具体指具有下述任一功能：

1）增强植物对TuMV的抗性；

2）增强植物对除草剂的抗性。

所述植物具体为拟南芥或十字花科作物；所述十字花科作物具体为油菜或白菜。

所述增强植物对TuMV的抗性是通过抑制TuMV复制实现的。

所述TuMV具体为TuMV-C4和/或BJ-R01。

所述除草剂具体为草铵膦除草剂。

所述RNA的编码基因也属于本发明的保护范围。

含有所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或宿主菌也属于本发明的保护范围。

所述重组载体具体为重组表达载体或重组克隆载体。

所述重组表达载体为将DNA片段插入出发载体的多克隆位点中得到的；所述DNA片段为X正向—连接区—X反向；X正向为SEQ ID No.1中第15-380位核苷酸所示，X反向为X正向的反向互补片段。

具体的，所述出发载体为pBBBast。

所述的重组表达载体中，所述X正向—连接区—X反向片段具有序列表中SEQ ID№.3所述的第1365-2919位核酸序列。

本发明的另一个目的是提供所述RNA、所述RNA的编码基因、所述含有所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或宿主菌的如下至少一种应用：

1）制备抗TuMV的产品；

2）增强植物对TuMV的抗性；

3）增强植物对草铵膦除草剂的抗性。

所述应用中，所述植物具体为拟南芥或十字花科作物；所述十字花科作物具体为油菜或白菜。

所述增强植物对TuMV的抗性是通过抑制TuMV复制实现的。

所述应用中，所述TuMV具体为TuMV-C4和/或BJ-R01。

所述应用中，所述除草剂具体为草铵膦除草剂。

本发明的再一个目的是提供一种培育转基因植物的方法，是将所述的重组表达载体转入目的植物，得到转基因植物；所述转基因植物与所述目的植物相比，具有如下至少一种性状：1）对TuMV的抗性增强；2）对除草剂的抗性增强。

所述对TuMV的抗性增强是通过抑制TuMV复制实现的。

所述方法中，所述TuMV具体为TuMV-C4和/或BJ-R01。

所述方法中，所述除草剂具体为草铵膦除草剂。

所述方法中，所述目的植物具体为拟南芥或十字花科作物；所述十字花科作物具体为油菜或白菜。

附图说明

图1为中间载体的酶切验证结果，其中M为分子量标记；泳道1为pHannibal-CI载体的酶切结果；泳道2为连入反向片段pHannibal-CI(-)载体的酶切结果；泳道3为pHannibal空载体的酶切结果。