[发明专利]检测呕吐型蜡样芽孢杆菌的引物、探针及方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测呕吐型蜡样芽孢杆菌的特异性引物，其特征在于，所述引物由检测gyrB基因和ces基因的两对引物组成；

所述检测gyrB基因的上下游引物的核苷酸序列分别由SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.4所示；

所述检测ces基因的上下游引物的核苷酸序列分别由SEQ IDNO.5、SEQ ID NO.6所示。

2.与权利要求1所述引物配合使用的荧光探针，其核苷酸序列由SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示。

3.一种呕吐型蜡样芽孢杆菌的检测方法，其特征在于，以样品总DNA为模板，利用权利要求1所述的引物和权利要求2所述的探针进行实时荧光定量PCR，根据扩增曲线判定结果。

4.含有权利要求1所述引物和/或权利要求2所述探针的试剂盒。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：阳性对照、DNA聚合酶、反应体系缓冲液、Mg²⁺、dNTP和超纯水。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，其工作反应体系为：5U/μL DNA聚合酶1-2U，10×Taq Buffer with(NH₄)₂SO₄（100mM Tris-HCl(pH8.8)，750mM(NH₄)₂SO₄）2.5μL，10mM dNTP0.5-1.5μL，25mM MgCl₂2-5μL，引物探针混合物1.0μL，DNA模板2μL，超纯水补至25μL。

7.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，其工作程序为：

95℃预变性10min，1个循环；95℃变性15-30s，55-62℃退火延伸30～60s，40个循环；4℃保持。