[发明专利]一种高含量菊花总黄酮的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种植物中有效成分的分离纯化方法，特别是涉及一种采用酶-微波法提取菊花总黄酮的方法。

背景技术：

菊花为菊科多年生草本植物的干燥头状花序，具有清热解毒、疏风名目、平肝凉血等功效。其化学成分有黄酮类化合物、三萜类化合物和挥发油等。其中总黄酮是菊花的主要药效活性成分，具有降血压、扩张冠状动脉粥样硬化等作用，临床用于治疗高血压和冠心病等，常以总黄酮的含量来评价菊花的质量。黄酮类化合物是在植物中分布广泛的一类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效的成分，其在植物体内大部分与糖结合成苷类，小部分以游离（苷元）的形式存在。近年来黄酮类化合物的研究以倾向于其药用价值的开发，更多地涉及提取工艺的应用研究、黄酮类化合物的含量测定及制剂制备。

目前国内外黄酮粗品的提取方法主要有：溶剂萃取法、离子沉淀法、树脂吸附分离法、超临界流体萃取法、超声波浸提法、微波浸提法、酶解法等。具有耗时长、有效成分提取率低、操作复杂的缺点，不符合中药现代化的要求，亦不利于菊花总黄酮在各个行业的应用于发展。

发明内容：

本发明是针对现有制备高含量菊花总黄酮的方法所存在的缺陷而进行的研究，旨在提供一种高效性和选择性、操作简便、产率高、副产物少、可工业化实现的制备方法。

本发明的技术方案按照下列步骤进行：

a.将干燥的菊花粉碎，过50目筛；

b.向上述原料中加入酶量为原料的0.3%~0.7%，加入60~70%的乙醇溶液，料液比为1:15~25，调PH值为4.5~5.5，微波提取功率为250~350W，微波提取时间为90~150s；

c.将提取液回收乙醇得到提取物的水溶液，再用3~5BV的石油醚萃取，直到萃取液显无色为止，回收溶剂，得到稠膏；

d.所得稠膏用10~15倍的大孔树脂吸附，先用水洗脱，然后用3~5倍树脂量的50~70%的乙醇洗脱，最后回收溶剂、干燥、粉碎得到粉状提取物。

步骤d中所述的大孔吸附树脂型号为AB-8、HPD-20或D-101。

黄酮类化合物是胞内物质，其细胞壁主要由纤维素组成。纤维素酶是可以将纤维素水解成水溶性糖的复合酶类。菊花用纤维素酶处理后，细胞壁的水解破裂，有利于细胞内物质的溶出。而微波是一种超高速电磁波，具有很强的穿透作用，是植物细胞中的水分或邮寄溶剂迅速升温升压，细胞壁穿孔，使成分从细胞中溶出，以增加菊花中有效成分在溶剂中的溶解，而且微波电磁场使分子运动短时间内加剧，从而缩短了时间，提高了提取率。本发明把酶法和微波提取两种技术联用，优势互补，大大地提高了菊花总黄酮的提取率。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将干燥的菊花粉碎，过50目筛；向原料中加入酶量为原料的0.3%，加入60%的乙醇溶液，料液比为1:15，调PH值为4.5，微波提取功率为250W，微波提取时间为100s，将提取液回收乙醇得到提取物的水溶液，再用3BV的石油醚萃取，直到萃取液显无色为止，回收溶剂，得到稠膏；所得稠膏用10倍的AB-8大孔树脂吸附，先用水洗脱，然后用3倍树脂量的50%的乙醇洗脱，最后回收溶剂、干燥、粉碎成细粉，即得菊花总黄酮提取物，经检测，提取物中菊花总黄酮含量为68.6%。测定方法，以芦丁标准品为对照，按紫外分光光度测定吸收度，计算总黄酮的含量。下同。

实施例2：

将干燥的菊花粉碎，过50目筛；向原料中加入酶量为原料的0.5%，加入70%的乙醇溶液，料液比为1:20，调PH值为5.0，微波提取功率为300W，微波提取时间为120s，将提取液回收乙醇得到提取物的水溶液，再用4BV的石油醚萃取，直到萃取液显无色为止，回收溶剂，得到稠膏；所得稠膏用15倍的HPD-20大孔树脂吸附，先用水洗脱，然后用4倍树脂量的60%的乙醇洗脱，最后回收溶剂、干燥、粉碎成细粉，即得菊花总黄酮提取物，经检测，提取物中菊花总黄酮含量为71.4%。

实施例3：

将干燥的菊花粉碎，过50目筛；向原料中加入酶量为原料的0.7%，加入65%的乙醇溶液，料液比为1:25，调PH值为5.5，微波提取功率为350W，微波提取时间为150s，将提取液回收乙醇得到提取物的水溶液，再用5BV的石油醚萃取，直到萃取液显无色为止，回收溶剂，得到稠膏；所得稠膏用12倍的D-101大孔树脂吸附，先用水洗脱，然后用5倍树脂量的70%的乙醇洗脱，最后回收溶剂、干燥、粉碎成细粉，即得菊花总黄酮提取物，经检测，提取物中菊花总黄酮含量为70.1%。