[发明专利]黄芩苷在制备治疗急性溶血性尿毒综合征药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及黄芩苷在制备治疗急性溶血性尿毒综合征药物中的应用，属于医药领域。

背景技术

黄芩苷（Baicalin）是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有明显的抗真菌活性，尤其对酵母型真菌具选择性作用，最低抑菌浓度(MIC)在70‐100μg/ml之间。但未见黄芩苷用于治疗由大肠杆菌引起的急性溶血性尿毒综合征的报道。

急性溶血性尿毒综合征通常是由大肠杆菌分泌的II型志贺毒素引起的肾脏损伤，通常是严重的并发征，一般在老年人和儿童较容易发病，病死率极高。近年来由于抗生素的大量使用导致大肠杆菌耐药菌株越来越多，临床上对大肠杆菌感染的治疗面临严峻的挑战，而通常抗生素能够促进耐药性大肠杆菌II型志贺毒素的分泌，进而导致疾病的进一步加重。因此，寻找新型、安全的治疗药物迫在眉睫。黄芩苷是来源于我国传统中药材黄芩、木蝴蝶等的成分，本发明研究证实了黄芩苷对大肠杆菌II型志贺毒素，尤其是耐药性大肠杆菌II型志贺毒素引起的急性溶血性尿毒综合征具有较好的治疗效果。

发明内容

黄芩苷的分子结构如下：

本发明发现了黄芩苷对大肠杆菌II型志贺毒素引起的急性溶血性尿毒综合征具有较好的治疗效果。尤其是耐药性大肠杆菌II型志贺毒素引起的急性溶血性尿毒综合征具有更好的治疗效果。

本发明同时提供了黄芩苷在制备治疗急性溶血性尿毒综合征药物中的应用。

本发明技术方案优选黄芩苷在制备由大肠杆菌II型志贺毒素引起的急性溶血性尿毒综合征药物中的应用。

本发明可将黄芩苷和药学上可接受的辅料制备成各种剂型。本发明所述药物，包括药学上可接受的任何剂型。

本发明优选将黄芩苷制备成注射剂、胶囊、片剂、粉针剂等剂型。

本发明与用抗生素治疗相比较，使用黄芩苷治疗具有无耐药性，治愈率高的优点。

附图说明

图1.分子对接发现黄芩苷结合于Stx2A亚基酶活性中心（左图为黄芩苷与Stx2的结合方式，右图为黄芩苷与Stx2的结合位点）。

图2.复合物体系自由能贡献分析（横轴为氨基酸种类，纵轴为自由能变化；Etotal为总结合能，E_vdw为范德华力，E_ele为静电作用力，E_sol为非极性溶剂化能）。

图3.黄芩苷对小鼠急性尿毒综合征存活率的影响（横坐标为观察时间，纵坐标为存活率，d的单位为天，PBS为阴性对照组，Stx为感染未给药组，Stx+BAI为给药组）。

图4.注射黄芩苷后急性尿毒综合征小鼠肾脏病理组织学变化（PBS为阴性对照组，Stx为感染未给药组，Stx+BAI为给药组）。

图5.黄芩苷对急性尿毒综合征小鼠肾功能的影响（横坐标为处理方式，纵坐标为浓度，Con为阴性对照组，Stx+BAI为给药组，Stx为感染未给药组）。

具体实施方式

通过对Hela细胞的保护作用以及小鼠性溶血性尿毒综合征模型证实了黄芩苷治疗II型志贺毒素感染的作用。

1.黄芩苷对Hela细胞的保护作用

将培养的Hela细胞以每孔15000个细胞铺到96孔细胞培养板中，培养24小时完全贴壁后每孔加入纯化的II型志贺毒素50pg，并加入不同梯度的黄芩苷溶液，置于CO₂培养箱中培养72小时后离心去除细胞培养液上清检测其乳酸脱氢酶释放量，通过乳酸脱氢酶释放评价其对细胞的保护作用。结果显示黄芩苷能显著抑制II型志贺毒素导致的Hela细胞毒性作用，并呈现剂量依赖性。加入不同浓度的黄芩苷后Hela细胞的存活率如下表1：

表1.黄芩苷对II型志贺毒素导致的Hela细胞毒性的抑制作用

黄芩苷抗II型志贺毒素机制分析及靶点确证

应用分子模拟和对接发现黄芩苷能结合到II型志贺毒素的活性口袋中，从而抑制了其活性的发挥，通过分解复合物体系的自由能，发现对复合物体系自由能贡献较大的氨基酸是77位酪氨酸和204位精氨酸。进一步将得到的数据应用点突变技术和荧光淬灭技术进行验证，结果发现计算机模拟结果和验证结果一致。黄芩苷结合到II型志贺毒素的77和204位的氨基酸导致其失去酶活性从而抑制了其活性作用的发挥，黄芩苷与II型志贺毒素结合位点见图1，结合能分析见图2。

小鼠急性溶血性尿毒综合征实验治疗学研究

3.1小鼠急性溶血性尿毒综合征模型