[发明专利]一种PSMA5蛋白在奶山羊乳腺的CLA合成中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种PSMA5蛋白在奶山羊乳腺的CLA合成中的应用。 

背景技术

共轭亚油酸(CLA)是反刍动物乳中发现的具有抗癌、抗糖尿病、抗动脉硬化症等多种功能的功能性脂肪酸。但是实际乳中CLA的含量还远不能达到其生理功能。因此，为了提高乳中CLA合成，需要了解其合成途径和机制。通过研究已经知道，乳中CLA是通过2个途径达到。首先是通过瘤胃内摄取的亚油酸在瘤胃微生物的作用下生成CLA，但是其合成量仅仅占整体的30％左右，同时生成的CLA会进一步在瘤胃内被加氢饱和成反式油酸(TVA)，直到变成硬脂酸，另一方面，在瘤胃内亚麻酸不能生成CLA，但是会氢化为反式油酸(TVA)，这些TVA进入乳腺组织中再通过SCD的去饱和作用生成CLA。这个过程CLA合成占全体的70％以上。对于反刍瘤胃内CLA的合成调控技术已经趋于成熟，但是乳中CLA的含量远不能满足发挥其正常生理功效。因此，需要对乳腺中CLA的合成进行调控，但是对于乳腺中CLA内源性合成的原理尽管有所了解，但是除了已知SCD外，并不了解还有何种蛋白直接或间接参与调控CLA的合成。因此，为了大幅度提高乳中CLA的含量，需要掌握乳腺中CLA合成的调控机制。除了SCD外，还需要发现其他蛋白是如何参与CLA的合成，并系统掌握其调控机制，才能进一步提高乳中CLA的含量。因此，本项研究利用蛋白组学技术，筛选TVA在乳腺中内源性合成CLA时相关的蛋白，并对其进行功能分析。 

近几年对乳脂合成相关基因的研究是一个热点。当前国内外的研究侧重在整体性考虑乳脂合成相关基因的网络调控，而对某一脂肪酸，特别是功能性脂肪酸的合成调控研究则比较少。而本研究则利用蛋白组学方法寻找在奶山羊乳腺组织中内源性合成功能性脂肪酸-共轭亚油酸 (CLA)相关的蛋白，通过研究第一次发现了PSMA5蛋白与CLA的合成有关，研究结果具有重要的意义和前沿性。从技术手段来看，本项研究利用了成熟的蛋白组学技术，但并没有仅仅停留在乳腺组织的蛋白组学研究，而是进一步通过蛋白质印迹手段对发现的蛋白进行验证，对于验证的蛋白则又通过乳腺上皮细胞的培养，利用气相色谱法分析CLA合成量变化，利用荧光定量PCR技术分析基因的表达变化，最终确认新发现的蛋白PSMA5与CLA的合成具有紧密的联系，是一种新的调控蛋白。因此，本项研究应用了多种先进的技术手段对乳腺中CLA的合成相关蛋白进行了系统的分析和鉴定，第一次发现PSMA5与CLA的合成有关，研究结果达到了国际先进水平。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种PSMA5蛋白在奶山羊乳腺的CLA合成中的应用。 

一种PSMA5蛋白在奶山羊乳腺的CLA合成中的应用，其具体步骤如下： 

步骤1：选择泌乳中期的奶山羊6头，随机分成2组； 

步骤2：第一组颈静脉注射TVA150mg一天二次，共计4天，另一组则注射生理盐水(溶解TVA的溶剂)150mg，一天二次，共计4天； 

步骤3：分别测定第一组和第二组乳中CLA和TVA的含量，乳腺组织中SCD的蛋白表达量； 

步骤4：通过蛋白组学分析不同处理乳腺组织； 

步骤5：通过蛋白印迹手段确定蛋白组学结果； 

步骤6：取牛乳腺上皮细胞MAC-T细胞株，通过分化诱导以后处理TVA6小时，并且每个小时采集一次细胞样品； 

步骤7：检测细胞样品中CLA的含量，SCD和PSMA5的mRNA值。 

本发明利用蛋白组学技术发现了乳腺组织中TVA内源性合成CLA时 相关的新蛋白，并利用蛋白质印迹检测发现的蛋白，发现仅有一个蛋白PSMA5与蛋白组学结果一致。进一步测定PSMA5在分化的牛乳腺上皮细胞MAC-T中，TVA处理下CLA合成时PSMA5的mRNA表达呈上升，而SCD基因的表达仅在TVA处理2小时上调。说明PSMA5在乳腺组织和乳腺上皮细胞中TVA内源性合成CLA时有关联，是新发现的CLA内源性合成的调控蛋白。通过本项研究，发现了除SCD以外，还有PSMA5蛋白与CLA的合成具有紧密联系，这为CLA在乳腺组织中内源性合成的机制的提供了新的方向。 

附图说明

图1为本发明步骤1-3中注射TVA对乳中CLA和TVA含量的影响示意图； 

图2为本发明步骤1-3注射TVA对乳腺中SCD表达量的影响示意图； 

图3为本发明步骤1-3中注射TVA对乳腺中SCD表达量的影响柱状示意图； 

图4为本发明中步骤4TVA处理组与对照组比较的蛋白组学银染结果示意图；