[发明专利]一种从茶叶籽粕中提取酪氨酸酶抑制剂的方法

权利要求书

1.一种从茶叶籽粕中提取酪氨酸酶抑制剂的方法，包括粉碎茶叶籽粕，其特征在于，包括以下具体步骤：

步骤A：将茶叶籽粕预处理后进行脱脂，以茶叶籽粕和体积浓度95%的乙醇水溶液为1g：15ml～1g：25ml的比例，向脱脂后的茶叶籽粕中加入体积浓度95%的乙醇水溶液，在40～50℃下提取30～40min，然后以12000转/分钟离心20分钟后，得到滤渣和提取液；

步骤B：以步骤A得到的滤渣和缓冲液为1g：20ml～1g：30ml的比例，向步骤A得到的滤渣中加入缓冲液，在40～60℃下浸提2～3h，再超声提取10～20min后，以12000转/分钟离心20分钟，得到提取液；所述缓冲液为PH是7～9，且含占脱脂后茶叶籽粕干重3～5%的碱性蛋白酶的缓冲液；

步骤C：将步骤A得到的提取液真空浓缩到原体积的1/5～1/15，然后以浓缩后的提取液和氯仿的体积比为1：1的比例，向浓缩后的提取液中加入氯仿进行萃取，得到萃余液；

步骤D：将步骤B得到的提取液真空浓缩到原体积的1/5～1/7，过D101大孔树脂进行柱层析，用体积浓度分别为20％、60％和100％的乙醇溶液进行梯度洗脱，洗脱流速为1ml/min，收集60%乙醇洗脱液；

步骤E：将步骤C中得到的萃余液和步骤D中得到的60%乙醇洗脱液混合，浓缩后冷冻干燥，即得到从茶叶籽粕中提取酪氨酸酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的一种从茶叶籽粕中提取酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤A中的预处理是将茶叶籽粕粉碎，然后过40～60目筛。

3.根据权利要求1所述的一种从茶叶籽粕中提取酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤A中的脱脂方法是：按照预处理后的茶叶籽粕和正己烷为1g：10ml～1g：20ml的比例，向预处理后的茶叶籽粕中加入正己烷，在30～50℃下浸提1～2h，然后以5000转/分钟离心15分钟后弃上清液，取残渣烘干。

4.根据权利要求1所述的一种从茶叶籽粕中提取酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤B中的碱性蛋白酶的活力不小于20000U/g。

5.根据权利要求1所述的一种从茶叶籽粕中提取酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤B中的缓冲液是磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。

6.根据权利要求1所述的一种从茶叶籽粕中提取酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，所述步骤B中的超声提取的频率是150～250W。