[发明专利]一种检测CYP2D6基因多态性的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因测序技术领域，具体涉及一种检测CYP2D6基因多态性的试剂盒及方法。

背景技术

细胞色素P450（CYP450）是由亚铁血红素-硫醇盐蛋白组成的主要分布在内质网和线粒体内膜上一类基因家族，除了参与生物体内的甾醇类激素合成以外，还可以参与体内的内源性物质和外源性物质的代谢。细胞色素P450的结构、功能以及在药物代谢中的作用在国内外均得到了较广泛的研究。在遗传药理学上具有重要意义的细胞色素P450家族中，由CYP2D6基因编码酶是其成员之一，该基因位于22q13.1。研究表明在临床上它参与了如异喹胍(肾上腺素能阻断药物)、司巴丁和普罗帕酮(抗心律失常药物)以及阿米替林（抗抑郁药）等25%以上的常用药物的代谢。CYP2D6是所有参与药物代谢的细胞色素P450基因家族中唯一不能被诱导的酶，已知的等位基因变异就超过了90个，目前已经报道有105种，造成了不同的CYP2D6基因多态性，CYP2D6基因多态性具体详见CYP等位基因数据库（http://www.cypalleles.ki.se），而CYP2D6基因多态性对酶的个体活性有重要影响，其中某些产生弱代谢表型，使代谢能力下降，如CYP2D6*3、CYP2D6*4、CYP2D6*5、CYP2D6*6、CYP2D6*7等基因多态性。CYP2D6基因的两种正常基因型为CYP2D6*1、CYP2D6*2（C2850T突变）。CYP2D6酶对司巴丁、美托洛尔和异喹胍等药物的代谢在高加索和东方人中是独立的，且药物间不存在相互作用，而对一些非洲人群，上述药物之间却存在一定的相互作用，其原因可能是CYP2D6基因多态性和干扰性药物、饮食结构等因素的作用。目前，在欧洲人群中共检测出有53种不同的CYP2D6等位基因。研究表明，异喹胍等药物慢代谢者是具有某些缺陷等位基因，如CYP2D6*3，由于发生2549delA，导致编码蛋白质出现框移，致使酶的活性丧失，还如CYP2D6*9，由于发生三联体密码子2615_2617delAAG缺失，尽管未发生框移，但导致编码氨基酸缺乏使产生的活性较低，再比如CYP2D6*4为C100T和G1846A共同突变，CYP2D6*5为整个基因缺失突变，CYP2D6*10为C100T突变，另外，还有些为整个基因的重复突变。研究表明，CYP2D6基因多态性在不同种族人群中的分布频率具有较大的差异，在东方人中尚未发现CYP2D6*3和CYP2D6*4基因多态性，CYP2D6*5的突变频率与高加索人和非洲人差不多，但在东方人中发现了CYP2D6*10基因多态性，在东方人群中的突变频率高达50%，这种基因多态性是导致东方人CYP2D6酶活性降低的主要原因。

现有技术中采用直接测序法检测CYP2D6基因多态性，即首先采用PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）扩增不同的目的片段后，回收纯化PCR产物，然后进行测序。

由于直接测序法的检测时间过长，一般需要48个小时以上，使该检测的效率降低，因此，为检测CYP2D6基因多态性带来不便。

发明内容

针对现有技术中检测CYP2D6基因多态性的时间长、步骤繁琐、需要多次PCR的问题，本发明的目的在于提供一种检测CYP2D6基因多态性的试剂盒。

本发明的另一目的在于提供一种检测CYP2D6基因多态性的方法。

为了解决现有技术中检测CYP2D6基因多态性的时间长、步骤繁琐、需要多次PCR的问题，本发明提采用了以下技术方案：

一种检测CYP2D6基因多态性的试剂盒，包括，其特征在于，所述检测用引物包括：CYP2D6基因第1外显子至第9外显子的全长扩增特异性引物，以及CYP2D6基因第1外显子上下游测序引物、CYP2D6基因第2外显子上下游测序引物、CYP2D6基因第3～4外显子上下游测序引物、CYP2D6基因第5～7外显子上下游测序引物和CYP2D6基因第8～9外显子上下游测序引物中的至少一对，其中：

所述CYP2D6基因第1外显子至第9外显子的全长扩增特异性引物的上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；

所述CYP2D6基因第1外显子至第9外显子的全长扩增特异性引物的下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；

所述CYP2D6基因第1外显子测序引物的上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:3所示；

所述CYP2D6基因第1外显子测序引物的下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:4所示；