[发明专利]一种以人类复制缺陷腺病毒为载体的日本血吸虫病疫苗的构建及应用

说明书

技术领域

一种以人类复制缺陷腺病毒为载体的日本血吸虫病疫苗，目的在于预防日本血吸虫的感染。本发明属于血吸虫病防治领域。 

背景技术

血吸虫病是一种严重危害人畜健康的感染性寄生虫病，流行于全球的76个国家、地区，有约6亿人受到该病的威胁，感染人口达2亿。我国是日本血吸虫病流行最为严重的国家，经过多年积极有效的防治，流行区被压缩在长江沿线的湖南、湖北、江西、安徽、江苏以及大山区的四川、云南等省份，它严重危害疫区人群及家畜的身体健康、严重影响当地社会经济发展和社会进步。

疫苗作为一种相对便宜且长效的防治措施，研制安全、有效、经济的血吸虫病疫苗，首先控制家畜感染，是当前血吸虫病防治工作中亟待解决的问题。由于血吸虫在终宿主体内不繁殖，如果一种疫苗能够诱导宿主产生50%的保护力就可有效减轻虫卵对宿主的损害、减少虫卵对环境的污染。目前国内外的研究人员已发现了多个疫苗候选分子并构建了多种日本血吸虫病疫苗，包括DNA疫苗、蛋白疫苗、多肽疫苗等，但动物实验结果显示这些疫苗的保护力均不理想，动物体内的减虫率仅为20%~30%，减虫率无法达到世界卫生组织提出的50%的要求。

腺病毒载体作为一种新型的疫苗递送途径，是一类置换了其中的病毒基因片段E1区和/或E3区的复制缺陷非辅助病毒依赖型载体，其具有转染宿主范围广、可在增殖和非增殖细胞中感染和表达目的基因、又不整合染色体、无插入突变性且可同时表达多个基因等优点，因此在基因治疗及疫苗研究领域得到了广泛的应用并显示了很好的应用前景。而在日本血吸虫病疫苗研究领域还未见利用重组腺病毒作为疫苗递送载体的报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种新型、有效的日本血吸虫病疫苗——重组腺病毒疫苗，该疫苗以人类5型复制缺陷腺病毒为载体，以优化后的TPI基因为目的抗原；

本发明要解决的技术问题之二是提供一种制备日本血吸虫病重组腺病毒疫苗的方法；

本发明要解决的技术问题之三是提供一种基于疫苗的日本血吸虫病防治措施。

本发明的技术方案：一种重组人5型腺病毒载体疫苗株（Recombinant Human Adenovirus Serotype 5），其命名为rAd-SjTPI.opt，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：V201328。

所述的重组人5型腺病毒载体疫苗株，该疫苗是以人类复制缺陷腺病毒为载体的日本血吸虫病疫苗，将保护性抗原基因克隆入由穿梭质粒和腺病毒骨架质粒同源重组产生的腺病毒载体，并在293细胞中包装获得重组腺病毒，该疫苗具有预防日本血吸虫感染的效果；

所述的保护性抗原基因为优化后日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶基因SjTPI.opt；

所述的穿梭质粒为pShuttle-CMV，腺病毒骨架质粒为pAdEasy-1；

所述的腺病毒载体为E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒Ad5；

所述的腺病毒包装所用细胞为整合腺病毒E1基因的293细胞；

所述的获得重组腺病毒为rAd-SjTPI.opt。

所述的重组人5型腺病毒载体疫苗株在血吸虫病防治中的应用，具有预防日本血吸虫感染的效果，该重组人5型腺病毒载体疫苗免疫动物后，能够在免疫动物体内稳定表达外源蛋白，诱导宿主产生较高的特异性体液及细胞免疫应答，保护力可超过50%。

1、腺病毒的构建

（1）SjTPI.opt基因的扩增及穿梭质粒的构建