[发明专利]一种发光菌的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种发光菌培养基的制备，以及利用该培养基培养发光菌的方法。

背景技术

发光细菌是进行生物发光的一类细菌。其多数为海生，与发光浮游生物同是引起海面发光的原因。发光菌形态虽多种多样，但生理特性却非常相似。一般对明胶不产生液化，分解蛋白质后不形成毒物，常寄生在各种动物体上引起“发光病”，即寄生发光。目前，国内常用的3种发光细菌为：明亮发光杆菌、费氏弧菌、青海弧菌。

其中，明亮发光杆菌是革兰氏阴性菌,可在水质急性毒性的测定中所使用。费氏弧菌是一种生长在海洋中的革兰氏阴性菌，普遍存在于海洋环境及海洋生物体中，是某些海洋鱼类的致病菌。研究人员发现当菌群密度达到一定阈值时费氏弧菌会产生集体发光现象；后来的研究表明此生物发光现象是因为其自诱导剂的积累引起的；费氏弧菌通过该自诱导剂进行相互交流，启动相关基因的表达，从而引起其表型的变化。任何对细胞代谢机制的抑制作用，如各种无机毒物与有机毒物，都会导致其发光的减少，所以费氏弧菌目前被普遍作为环境测试指标。青海弧菌能持续稳定地发射蓝绿光（最大发射波长485nm），一旦遭遇有毒有害物质，很快会被抑制发光，其发光抑制程度与所受的有毒有害物质的毒性及浓度有对应关系，且它是一种淡水菌，所以被广泛应用于饮用水监测中。

目前，市场上现存的发光菌的液体培养基成本较高，不利于发光菌的试验研究及推广应用。且对于发光菌的培养条件尚未有成熟的方案，致使发光菌的液体培养菌含量不稳定。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的一个目的是提供一种适于发光菌生长的培养基。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供的发光菌的培养基，其每升中包含胰蛋白胨4～10g，牛肉浸膏5～10g，甘油2～4mL，磷酸二氢钾0.3～1.5g，十二水合磷酸氢二钠11～13g，氯化钠21～35g。

优选为，其每升中包含胰蛋白胨5g，牛肉浸膏7.5g，甘油3mL，磷酸二氢钾1g，十二水合磷酸氢二钠12.6g，氯化钠30g。

本发明的另一个目的是提供了一种使用上述培养基培养发光菌的方法。

上述培养方法，包括以下步骤：取复苏好的菌液，按培养基体积的1.5%～3%接种到上述培养基中，25℃，180rpm培养18h。

优选为，上述培养方法，包括以下步骤：取复苏好的菌液，按培养基体积的2%接种到上述培养基中，25℃，180rpm培养18h。

上述方法还包括：将费氏弧菌的冻干粉用3%NaCl溶液进行溶解，复苏10min，接种到上述液体培养基中，25℃，180rpm培养18h。

使用本发明提供的用于发光菌培养的培养基，以及使用本发明提供的方法培养发光菌后，可使发光菌在液体培养基中的菌含量可稳定超过1×10⁸CFU/mL，有利于发光菌的研究应用及其冻干粉的生产。且本发明提供的发光菌培养基成本低，有效降低了发光菌的研究成本，有利于发光菌的推广应用。

附图说明

图1是本发明提供的培养基与对照组培养基培养菌液发光度的比较。

具体实施方式

以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的前提下，对本发明所作的修饰或者替换，均属于本发明的范畴。

实施例1发光菌含菌量以及生产成本的对比试验

制备不同配比的发光菌培养基，用于对比试验，各实验组的具体成分见表1：

表1：培养基的成分

将上述各实验组中的组分，配置成100ml的培养基，高压后备用。且以胰蛋白胨0.5g、酵母浸膏粉0.5g、甘油0.3mL、磷酸二氢钾0.1g、十二水合磷酸氢二钠1.26g，氯化钠3g，溶于100mL水中制成培养基，作为对照组，该对照组的组分是目前使用的用于发光菌培养的培养基。

向培养板中加样，每组试验加3个孔，每个孔加350uL培养基，向每个加样孔中接种7uL已摇好的费氏弧菌菌液，吹打均匀。设置试验仪：反应时间为18h，温度25℃，振幅normal，速度180rpm，每隔20min测定一次OD值。含菌量以及生产成本，结果见表2。

表2：不同组分的培养基培养结果与成本计算