[发明专利]核苷酸序列的用途

说明书

本申请是专利申请号：201210243379.X，申请人：泸州医学院，申请日：2012年7月13日的分案申请。

技术领域

本发明涉及核苷酸序列的用途，具体涉及调控ERα表达的核苷酸序列序列的用途。

背景技术

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，好发于40～60岁绝经前后的妇女，发病率仅次于胃癌和肺癌，并有逐年上升的趋势。乳腺癌的治疗方式众多，包括外科治疗、化学治疗、放射治疗和中医中药治疗。外科治疗主要方式是手术切除，化学治疗包括手术前、中和后的化疗，放射治疗是作为手术后补充治疗或晚期、复发病例的姑息治疗，中医中药治疗是我国传统治疗方法，可改善患者的全身情况，减轻化、放疗的反应，常作为手术、放射治疗的辅助手段。大量研究表明，不同亚型的乳腺癌之间具有不同的生物学特征，并不是任意一种乳腺癌治疗方法对所有的患者都适用。

雌激素受体(ERα)是与乳腺癌密切相关的小分子，大多数乳腺癌发生最初，表达雌激素受体(ERα)，并依赖雌激素生长，对激素敏感、抗性弱，预后好，治疗难度小。随着病程发展，一些乳腺癌不再表达ERα，获得非依赖雌激素的特征，对激素的敏感性差、抗性强，预后差，治疗难度大，属于恶性乳腺癌，恢复ERα表达后可以恢复乳腺癌恢复激素治疗的敏感性，治疗难度降低。

因此，可以通过检测乳腺癌细胞ERα表达水平，判断乳腺癌是否为恶性乳腺癌，还可以通过控制ERα的表达改善乳腺癌的恶性程度。

发明内容

本发明的发明目的之一是提供ERα基因上的TWIST蛋白结合位点。本发明另一发明目的是提供检测前述结合位点与TWIST蛋白是否结合的试剂盒，以及抑制前述结合位点与TWIST蛋白结合的药物。

上述ERα基因上的TWIST蛋白结合位点，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，该位点含有601个碱基，其中，长度为332bp的序列是TWIST蛋白结合的关键序列，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。用基因工程的方法，可将SEQ ID NO.1或者SEQ ID NO.2所式的核苷酸序列克隆到其他载体上，形成重组载体，如，pGL-332ERα-Pro-Luc重组质粒。

NuRD复合体是一个多亚基的复合体，包括ATP酶部分和组蛋白脱乙酰酶部分，广泛参与基因转录抑制，TWIST蛋白通过募集NuRD复合体，结合到ERα基因的SEQ ID NO.1或者SEQ ID NO.2所示序列区域上，抑制ERα表达，导致乳腺癌恶化。

因此，一方面，可以通过检测TWIST蛋白是否结合到ERα基因的SEQ IDNO.1或者SEQ ID NO.2所示序列的区域上，确定待检乳腺癌是否为恶性乳腺癌，检测试剂盒包括任选的用于检测TWIST蛋白与SEQ ID NO.1或者SEQ IDNO.2所示核苷酸序列的结合物的试剂。该检测试剂可以为染色质免疫共沉淀技术用试剂和扩增SEQ ID NO.1或者SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的试剂。优选地，所述染色质免疫共沉淀技术用试剂包括抗TWIST蛋白抗体，所述扩增SEQ ID NO.1或者SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的试剂包括SEQ IDNO.7～8所示的引物对2。

另一方面，可以通过抑制TWIST蛋白或者NuRD复合体结合到ERα基因的SEQ ID NO.1或者SEQ ID NO.2所示序列的区域上，使ERα表达阳性，恢复恶性乳腺癌对激素敏感性。TWIST基因沉默剂可抑制TWIST基因表达，降低TWIST蛋白含量，抑制TWIST蛋白结合到ERα基因上，可以作为治疗恶性乳腺癌的药物。组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其衍生物可以抑制被募集到ERα基因上的NuRD复合体的活性，也可以作为治疗恶性乳腺癌的药物。优选地，所述的TWIST基因沉默剂为沉默TWIST基因的shRNA（shTWIST或者shT），其中，与TWIST基因相匹配的特异性核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，shRNA全长如SEQ ID NO.20所示；所述的组蛋白脱乙酰酶抑制剂为曲古抑素A。SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列是与TWIST基因相匹配的特异性核苷酸序列，能与TWIST特异性结合而沉默TWIST基因，该段序列为shRNA的核心序列，得到该序列后，本领域普通技术人员可以根据shRNA核心序列及载体性质设计得到其余核苷酸序列，也可以人工合成小分子干扰RNA（Small interfering RNA，siRNA)试剂。