[发明专利]一种分离纯化非达米星的方法

说明书

本发明提供了一种分离纯化非达米星的方法，所述方法在分离纯化中采用C8反相硅胶作为填料进行柱层析，将非达米星用醋酸溶解上样，流动相洗脱，收集样品，经分离纯化后得到的非达米星HPLC纯度≥99.5%，单杂≤0.10%。本方法提供的非达米星的纯化方法，采用具有高选择性和高载样量的新型介质，柱效高，分辨率高，分离纯化效果更好，保留时间短，洗脱剂用量少，克服了现有技术中因柱效低，分离度差，制备的非达米星纯度低，杂质多的缺点。

技术领域

本发明涉及一种分离纯化方法，具体涉及高纯度非达米星的分离纯化方法，尤其是涉及HPLC纯度在99%以上的非达米星的分离纯化方法。

背景技术

非达米星（通用名：fidaxomicin，商品名：Dificid）是一种18元大环内酯类抗生素，由桔橙指孢囊菌（Dactylosporangium aurantiacum）发酵得到，属于台勾菌素（Tiacumicins）类化合物。非达米星由Optimer公司研发，于2011年5月27日获FDA批准，是近20多年来首次被FDA批准用于治疗难辨梭菌（难辨梭状芽胞杆菌）相关性腹泻（CDAD）的抗生素。其作用机理新颖，主要是通过抑制细菌的RNA聚合酶而产生迅速的抗难治梭状芽孢杆菌感染（CDI）作用。其治疗CDI优于现有药物。非达米星CAS: 873857-62-6；分子式：C₅₂H₇₄Cl₂O₁₈；结构式如下式I：

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中国专利CN1688707A公开了采用反相介质压力液相色谱法，以硅胶键合C18为固定相，以乙腈/水/乙酸为流动相，提纯非达霉素的方法。该方法的缺点是只能制得93%纯度的非达霉素，收率只有30%，成本较高不适合工业化生产。

中国专利CN102993251A公开了一种用高效液相色谱纯化台勾霉素B的方法。该方法用Uni30BPC单分散性聚合物微球作为填料进行制备柱层析以制得较高纯度的非达霉素。但该方法的缺点是填料上样量少，制备色谱的投入大，成本高，台勾霉素B的回收率低。

中国专利CN102030791B公开了四种台勾菌素的制备方法，该方法将从大孔吸附树脂中提取的粗提物，先进行萃取和浓缩，得到粗品，粗品经过硅胶柱层析，凝胶柱层析，再次用硅胶柱层析，最后经过ODS反相中压液相色谱才能分别制备得到四中台勾菌素类化合物。该方法需要使用两次硅胶柱层析，并用到ODS反相中压液相色谱，操作繁琐，成本高。

现有技术中普遍存在纯化效率低，回收率低，分离效果差，操作繁琐的缺点。因此寻找一种操作简便，纯化效果好，回收率和纯度高的非达米星制备方法，对非达米星的产业开发具有很重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离纯化非达米星的方法，该方法不仅能提高非达米星的纯度和回收率，而且操作简单，收率高，生产成本低，适合于工业生产。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：一种分离纯化非达米星的方法，所述方法在纯化层析柱中采用C8反相硅胶作为填料进行柱层析，其中所述的C8反相硅胶填料粒径为5~50μm；优选，所述的C8反相硅胶填料粒径为5~30μm；进一步优选，所述的C8反相硅胶填料粒径为7~15μm；更进一步优选，所述的C8反相硅胶填料为UniSil 10-120-C8、SP-100-8-C8-HP、UniSil 10-170-C8、LiChrosorb RP-8、Kromasil 100-10-C8或Outstanding-7-C8。

所述的分离纯化非达米星的方法，是采用C8反相硅胶作为色谱柱的固定相，再将非达米星的样品溶液上样在色谱柱上，用流动相洗脱吸附在填料上的非达米星，收集样品。

进一步的，所述非达米星样品溶液是将非达米星粗品先用醋酸溶解，再用流动相稀释获得，优选将浓度稀释1倍。