[发明专利]双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH和用途

说明书

技术领域

本发明属于疫苗领域，具体涉及一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH。

背景技术

   猪瘟又称猪霍或者古典猪瘟(Classical swine fever,CSF)，其病原是猪瘟病毒(CSF virus,CSFV)。猪瘟是猪的重要传染病之一，其病理特征是小血管壁变性，导致内脏器官多发性出血、坏死和梗死。我国是养猪大国，预防接种猪瘟兔化弱毒疫苗(C-strain)是防控猪瘟的最有效方式，尽管如此，猪瘟仍是养猪业危害最为严重的传染病之一，在我国预防和控制猪瘟的发生，具有重要的经济意义和社会意义。在CSFV感染的或者C-strain疫苗免疫后的猪体内，特异性抗病毒中和抗体是机体最主要的抗病毒免疫反应，CSFV基因组编码地E2蛋白是机体产生抗猪瘟病毒血清抗体的最主要抗原蛋白，是研制基因工程疫苗和抗原、抗体诊断方法的最重要的候选蛋白。

1993年，Hamers等首先发现在骆驼和鲨鱼等血清中存在一种天然缺失轻链，仅有重链的IgG2和IgG3型的抗体，其抗原结合位点仅由重链可变区单结构域组成，故也称为单域重链抗体（variable domain of the heavy chain of HCAbs，VHH）。大量研究证实，缺失了轻链和 CH1恒定区VHH抗体仍保持同普通IgG抗体相同的生物学功能，并且表现出普通IgG抗体和单克隆不具备的新的生物学功能。VHH抗体拥有更长的抗原互补结合区（CDR3）氨基酸序列，不仅可与抗原表面的抗原表位结合，还能够深入具有裂缝凹陷结构的抗原内部，如酶的活性位点，病毒与宿主细胞结合位点等；因其是分子量小（单克隆抗体的1/10），所以组织穿透性能力强于常规IgG抗体，研究发现其甚至可以跨过血脑屏障，到达普通IgG抗体分子无法接触的位置，充分发挥VHH抗体的生物学功能；VHH抗体FR2 区存在一些不同于常规IgG抗体的亲水性氨基酸，使得 VHH 抗体在水溶液中具有良好的稳定性，可以实现抗体规模化生产和纯化，获得水溶性好、稳定性强、生物活性和抗体结构更加接近天然抗体的高纯度重组抗体；VHH与抗原结合的亲和力达到纳摩尔级，与单链抗体亲和力相当，该抗体作为一种小型化的基因工程抗体在病原学研究，高敏感性抗原诊断方法领域有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH，以解决现有猪瘟病毒抗原诊断试剂研发过程中存在的无法获得高纯度、高亲和力的抗猪瘟病毒抗体的生产和制备的问题。

本发明的另一个目的是提供一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH的用途。

本发明技术方案如下：一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH，其特征在于所述的抗体具有核苷酸序列：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3。

进一步的，本发明提供一种重组表达载体，含有所述的核苷酸序列。

进一步的，本发明提供一种宿主细胞，所述的宿主细胞为含有所述的核苷酸序列的原核细胞。所述的宿主细胞为含有所述的表达载体的原核细胞。

进一步的，本发明提供一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH在制备检测猪瘟病毒抗原诊断试剂中的应用。

本发明的发明特点是首次获得利用双峰驼筛选获得抗猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株抗原蛋白E2的VHH抗体编码序列；ELISA实验结果表明，E.coli中表达的重组VHH抗体与猪瘟病毒多克隆抗血清具有相同的抗原结合能力，可代替猪瘟病毒多克隆抗体用于猪瘟病毒抗原诊断试剂的研究中。

附图说明

图1为VHH抗体氨基酸特征分析图；

图2为SDS-PAGE分析抗CSFV E2 VHH抗体在E.coli中的表达图；

图2中 1：VHH-E2-1 包涵体，2：VHH-E2-1 上清；3：VHH-E2-2 包涵体，4：VHH-E2-2 上清；5 VHH-E2-3 包涵体；M： 蛋白质标准分子量（由上而下

分子量依次为：75, 65, 40, 35, 14 kDa）；6：VHH-E2-3 上清；7和8：空载体对照；9：未加IPTG对照组；图中箭头指示的是目的条带；

图3为 Western blotting分析VHH-E2蛋白图。

具体实施方式

下面的实施例可以进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1

一、双峰驼免疫、外周血淋巴细胞分离和cDNA合成