[发明专利]检测CYP4V2基因常见突变的试剂盒

权利要求书

1.用于检测CYP4V2基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于扩增样本DNA的PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括用于检测c.802-8_810del17insGC突变位点的特异性扩增引物I，所述特异性扩增引物I的上游引物序列如SEQ ID NO：4所示，所述特异性扩增引物I的下游引物序列如SEQ ID NO：5所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应试剂还包括用于检测c.992A>C突变位点的特异性扩增引物Ⅱ，所述特异性扩增引物Ⅱ的上游引物序列如SEQ ID NO：6所示，所述特异性扩增引物Ⅱ的下游引物序列如SEQ ID NO：7所示。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应试剂还包括用于检测c.1091-2A>G突变位点的特异性扩增引物Ⅲ，所述特异性扩增引物Ⅲ的上游引物序列如SEQ ID NO：8所示，所述特异性扩增引物Ⅲ的下游引物序列如SEQ ID NO：9所示。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶切反应的试剂，所述酶切反应的试剂包括限制性内切酶，所述c.802-8_810del17insGC突变对应的限制性内切酶为CdiI，所述c.992A>C突变对应的限制性内切酶为ApaI，所述c.1091-2A>G突变对应的限制性内切酶为CdiI。

5.权利要求4所述的试剂盒用于检测CYP4V2基因突变的方法，所述的方法为非诊断和治疗目的的方法，其特征在于，包括如下进行的步骤：

a取待检测的样本，提取全基因组DNA；

b以步骤a中的全基因组DNA为模板，加入所述PCR反应试剂，进行PCR扩增反应，得到PCR扩增反应产物；

c将步骤b中所得到的PCR扩增反应产物用所述酶切反应的试剂进行酶切反应,得到酶切产物；

d根据步骤c所得的酶切产物来判断待检测的样本是否存在CYP4V2基因的突变。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤b中，所述PCR反应试剂中PCR引物的上游引物和下游引物的摩尔比为1:1。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤b中，PCR反应的条件为：反应在ABI9700热循环仪上进行，95℃预变性5min，然后按照95℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸30sec为一个循环，进行34个循环后，95℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸5min，反应完毕后在4℃保存PCR产物。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤c中，所述PCR反应产物与所述酶切反应试剂中的限制性内切酶的比例为1ug:5U，所述酶切反应的条件为：反应在37℃恒温水浴锅中进行，反应时间为12h。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤d中，对步骤c所得的酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳结果来判断待检测的样本是否存在CYP4V2基因的突变。

10.权利要求1或2所述的试剂盒在用于检测结晶样视网膜色素变性疾病中的应用。