[发明专利]一种用于检测阿特拉津的金标二抗信号放大SRP免疫传感方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种信号放大表面等离子体共振(surface plasmon resonance，SPR)免疫传感方法，用于高特异性与高灵敏度快速检测阿特拉津，特别涉及于纳米金标记二抗的SPR信号放大方法。

背景技术

阿特拉津(Atrazine，AT)属三嗪类除草剂，通过抑制光合作用的电子传递而将杂草杀死，常用于防除玉米、高粱、甘蔗、果树等旱田作物的一年生阔叶和禾本科杂草。喷洒在农田中的AT，大部分扩散至空气或土壤里，然后随着降水及灌溉用水渗入地下，造成地下水污染。有研究表明，AT是一种雌激素干扰物，具有致畸可能性，甚至很低剂量的暴露也会增加健康风险。而且，它在环境中若干年仍能保持活性，引起生态环境的破坏。因此，2004年，欧盟将其列为禁用农药，日本也规定矿泉水中AT的最大残留限量为2ppb。中国颁布的《地表水环境质量标准-GB3838-2002》中，限定AT在地表水的残留量为3mg/L。美国国家环境保护局(U.S.Environmental Protection Agency，EPA)规定了饮用水中AT的最高允许浓度为3ppb，但是，美国地质调查局(United States Geological Survey，USGS)的研究表明，即使在低于EPA限定剂量的环境中，仍然能观测到AT对鱼类生殖的重大影响，会减少鱼类的繁殖[88]和产卵，并发现鱼的组织有异常。

因此，建立灵敏快速检测AT的方法，对于保护环境以及人们饮水和食品安全是十分必要的。目前常用于AT检测的方法有高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫吸附分析法(ELISA)以及气-质联用方法。但是，这些方法较费时，费溶剂。近年来，随着传感技术的发展和交叉学科的兴起，电化学传感器、压电传感器及微悬臂梁质量传感器，结合免疫技术、分子印迹技术越来越多地应用于环境监测领域，弥补了上述方法的不足。

表面等离子体共振(surface plasmon resonance，SPR)传感技术是一类高新微测量技术，是当前国际传感器领域的研究热点。利用SPR传感技术结合免疫分析技术，建立免疫传感方法对污染物进行检测，既发挥了SPR传感器实时、快速、无需标记的优势，又充分体现了免疫方法高特异性和高亲和力的特点，而信号放大方法的建立也极大的提高了SPR免疫传感的灵敏度，其具有很大开发潜力和广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种SPR免疫传感器方法用于检测阿特拉津。

本发明的第二个目的是提供一种运用纳米金标记的二抗进行SPR信号放大的方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种SPR免疫传感器运用纳米金标记的二抗进行信号放大的方法，具体步骤如下：

(1)将芯片表面用巯基烷酸修饰，采用EDC/NHS方法，将阿特拉津完全抗原固定于芯片表面，通过调节完全抗原浓度控制包被浓度。

(2)将步骤(1)修饰的SPR芯片装入仪器中，加入将不同溶度的小分子阿特拉津与阿特拉津单克隆抗体，进行竞争免疫反应。

(3)将纳米金标记的二抗加入反应体系中进行信号放大，绘制阿特拉津浓度与SPR信号响应的标准曲线，计算方法线性范围及最低检测限。

(4)以不加胶体金标记的二抗为对照，在相同条件下进行间接竞争免疫实验，验证该方法的放大效果

(5)选择扑草净，三聚氰胺，毒死蜱，和2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)作为类似物，进行特异性实验。

(6)利用建立的检测方法，连续多次对同一浓度的孔雀石绿溶液进行检测→再生→检测，测试所制备分子印迹膜的再生性能。

所述阿特拉津完全抗原优选为阿特拉津-OVA偶联物，阿特拉津-BSA偶联物。

所述纳米金标记的二抗加入方式优选为与小分子和抗体一步加入，与小分子和抗体二步加入。

附图说明

图1纳米金标记二抗的SPR免疫传感信号放大意图。

图2阿特拉津-OVA固定化过程的SPR信号变化。

图3纳米金标记二抗信号放大SPR传感器对阿特拉津的响应标准曲线。

图4无纳米金标记二抗与纳米金标记二抗信号放大对比图。

图5阿特拉津及其类似物的特异性实验结果。

具体实施方式

实施方式一：SPR检测平台的构建：