[发明专利]一种培美曲塞二钠中间体的分析检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱分析方法，尤其是一种培美曲塞二钠中间体的分析检测 方法。

背景技术

培美曲塞二钠由美国Eli Lilly公司开发，是一种新型多靶位叶酸阻滞剂，能够阻断癌 细胞分裂和增生过程中所需要的多种酶，甚至抑制细胞胸苷和嘌呤核苷酸生物合成中包括 所有叶酸依赖酶的活性，用于治疗恶性胸膜间皮瘤及非小细胞性肺癌。

N-[4-[2-(2-氨基-4,7-二氢-4-氧代-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸 二乙酯对甲苯磺酸盐是合成培美曲塞二钠的重要中间体，其化学式为C31H37N5O9S，结构式 如下：

其中，TsOH为对甲苯磺酸。

到目前为止，USP、EP、BP、JP以及中国药典和文献中均没有记载培美曲塞二钠中间 体的分析检测方法，但培美曲塞二钠中间体的分析检测对反应控制和收率提高有着重要的 作用，同时也直接影响着终产品的质量，所以建立一种稳定有效的分析检测方法对培美曲 塞二钠中间体进行质量控制是非常必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种培美曲塞二钠中间体的高效液相色谱分析检测方法，用于 培美曲塞二钠中间体的质量控制。

为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验，最终获得如下技术方案：

一种培美曲塞二钠中间体的分析检测方法，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱 柱（C18，4.6×250mm，5μm），以磷酸二氢钾溶液和乙腈为流动相，以检测波长为249～259nm， 进行高效液相色谱法分析检测。

所述的流动相中磷酸二氢钾溶液：乙腈的体积比为58～75:42～25，磷酸二氢钾溶液的浓 度为0.01～0.04mol/L。

进一步地，流动相中磷酸二氢钾溶液：乙腈的体积比优选为68:32，磷酸二氢钾溶液的 浓度优选为0.0265mol/L。

所述的检测波长优选为254nm。

本发明所述的分析检测方法，可通过以下步骤实现：

A、取培美曲塞二钠中间体样品适量，用流动相溶解，配制成每1mL含培美曲塞二钠 中间体0.1～0.7mg的样品溶液；

B、设置流动相流速为0.7～1.2mL/min，检测波长249～259nm，柱温为20～30℃；

C、取A的样品溶液20μL注入液相色谱仪，完成培美曲塞二钠中间体的分析检测；

其中：

高效液相色谱仪：Agilent1200液相色谱系统；

色谱柱：Agilent Extend-C18（4.6×250mm，5μm）；

流动相：0.0265mol/L的磷酸二氢钾溶液与乙腈按体积比68:32形成流动相；

检测波长：254nm；

柱温：25℃；

流速：1.0mL/min。

本发明涉及的分析检测方法，可以有效的将培美曲塞二钠中间体及其杂质分开，而且 该方法分离度高，线性关系良好，操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠，从而可 用于培美曲塞二钠中间体的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。

附图说明

图1实施例1的培美曲塞二钠中间体HPLC图谱。

图2实施例2的培美曲塞二钠中间体HPLC图谱。

图3实施例3的培美曲塞二钠中间体HPLC图谱。

图4实施例7的培美曲塞二钠中间体线性工作曲线。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保 护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的 保护范围之内。

实施例1

仪器与条件：Agilent1200液相色谱系统，VWD检测器，色谱柱：Agilent Extend-C18 （4.6×250mm，5μm）；检测波长：254nm；柱温为25℃；流速1.0mL/min；0.0265mol/L的 磷酸二氢钾溶液与乙腈按体积比68:32作为流动相。