[发明专利]分离精液的冷冻保藏方法

说明书

技术领域

本发明涉动物繁殖领域，具体而言，涉及一种分离精液的冷冻保藏方法。

背景技术

动物的性别控制(sex control)技术是通过对动物的正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产出人们期望性别后代的一门生物技术。具体的，该技术是利用动物的含有X染色体和含有Y染色体的精液中DNA含量的差异，借助特异性染色剂染色，然后根据发出的荧光强度，通过计算机预测精子类别，再通过给精液液滴附加电荷，根据静电原理，将含有X染色体的精液和Y染色体的精液分离，得到分离精液，如果得到的分离精液在短期内不用，则需要将得到分离精液冷冻保藏，以保证其活力。

在相关技术中，将分离精液冷冻的过程中，需要在其中加入乳化液以防止分离精液受到冷冻打击；但是常见的乳化液中通常含有大量的Egg yolk（蛋黄）；因此，在配置乳化液的过程中需要将乳化液进行离心、过滤等操作；离心的过程需要用到较多的离心管，过滤的过程需要利用特制的过滤膜，而离心管和特制的过滤膜的价格比较昂贵，进而使得整个配置乳化液过程的成本增加。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离精液的冷冻保藏方法，以解决上述的问题。

本发明的实施例中提供的分离精液的冷冻保藏方法，包括将分离精液在第一预定温度下冷却，得到初冻分离精液；在所述初冻分离精液中加入Tris B乳化液并在第一预定温度下进行乳化，混匀后得到乳化分离精液；其中所述Tris B乳化液由体积百分数为88%的Tris B缓冲液和体积百分数为12%的丙三醇组成；将所述乳化分离精液在第一预定温度下离心，得到分离精液沉淀；将所述分离精液沉淀在第一预定温度下通过悬混、计数以及灌装后得到待冷冻的分离精液；将所述待冷冻的分离精液通过程序冷冻仪进行冷冻，得到冷冻分离精液；将所述冷冻分离精液转移至液氮中，冷冻保藏。

本发明的实施例提供的分离精液的冷冻保藏方法，在将分离精液保藏的过程中，使用了由体积百分数为88%的Tris B缓冲液和体积百分数为12%的丙三醇组成Tris B乳化液作为乳化剂对初冻分离精液进行了乳化，Tris B乳化液可以对初冻分离精液起到保护作用，能够防止初冻精液在后续冷冻的过程中受到冷冻打击，进而影响精子的活力；而Tris B乳化液在乳化初冻分离精液的过程中不需要经过特制的过滤膜进行过滤，并且Tris B乳化液配置成本低，因此，降低了整个保藏过程的成本。

此外，本实施例的这种分离精液的冷冻保藏方法通过初冻、乳化、离心、悬混、计数、灌装以及程序冷冻仪冷冻等流程实现了将分离精液有效保藏的效果，冷冻保藏后的分离精液可应用于动物的繁育中，并按照生产需求人为的控制动物后代的性别，实现了快速繁育高产家畜的效果。

附图说明

图1示出了本发明实施例一提供的分离精液的冷冻保藏方法的流程图；

图2示出了本发明实施例二提供的分离精液的冷冻保藏方法的流程图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例并结合附图对本发明做进一步的详细描述。

本发明的实施例中提供了一种分离精液的冷冻保藏方法，包括以下步骤：

步骤101：将分离精液在第一预定温度下冷却，得到初冻分离精液；

具体的，在步骤101中，第一预定温度为3-5℃，优选4℃，冷却时间为80分钟-100分钟，优选90分钟。

步骤102：在初冻分离精液中加入Tris B乳化液并在第一预定温度下进行乳化，混匀后得到乳化分离精液；

步骤102中，乳化液起到将分离精液保护的作用，防止其在后续低温冷冻过程中受到冷冻打击，进而出现活力降低的缺陷，乳化的过程可以使得精液在处于较低的温度时，防止精子受到冷冻损害。因此，在本实施例中，Tris B乳化液为一种保护剂，其可以保护分离精液，使得其在冷冻过程中不受到冷冻打击。

其中，Tris B乳化液由体积百分数为88%的Tris B缓冲液和体积百分数为12%的丙三醇组成；

在本实施例中，每1000ml Tris B缓冲液可通过以下方法配置而成：将Tris（295mM）35.746g、Citri Acid Monohydrate(95.1mM)19.980g、D-Fructose(81.7Mm)14.712g准确称量后依次加入盛有需配液总量3/4的超纯水中烧杯内充分溶解；待完全溶解后用HCl溶液将pH值调为6.80；pH值调整后的溶液移入体积相对应的容量瓶内进行定容。用灭菌后板式过滤器（上层0.45μm的过滤膜，下层0.22μm的过滤膜）进行过滤灭菌后然后装入储存器皿。