[发明专利]修饰腺苷受体激动剂纳米探针及其制备方法和用途

权利要求书

1.修饰腺苷受体激动剂纳米探针，其通式如下：

IR783-Den-(PEG-Reg)x

通式中，Den为探针载体第五代聚酰胺-胺型树枝状聚合物(Dendrimer)；PEG为分子量为10-40k的聚乙二醇；IR783为羰花青类近红外荧光基团，Reg为腺苷A_2A受体激动剂Regadenason,x代表修饰在纳米探针上腺苷受体激动剂数目；

所述的腺苷A_2A受体激动剂Regadenason通过其氨基衍生物Reg-NH₂与双功能聚乙二醇键连标记到载体分子上，Reg-NH₂的分子式如下所示:

Reg-NH₂通过双功能聚乙二醇[马来酰亚胺-聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯(Mal-PEG-NHS)]连接到载体分子上，Mal-PEG-NHS的分子式如下所示：

所述的载体材料Den为第五代聚酰胺-胺型树枝状聚合物，每分子载体连接激动剂的数目为1-40个。

2.如权利要求1所述的修饰腺苷受体激动剂纳米探针，其特征在于，所述的载体材料Den为第五代聚酰胺-胺型树枝状聚合物，每分子载体连接激动剂的数目为1，4，8或16个。

3.权利要求1的修饰腺苷受体激动剂纳米探针的制备方法，其特征在于，其包括步骤：

步骤1：制备Reg-NH₂

2,6-二氯嘌呤核苷溶于氨饱和甲醇溶液中，80℃搅拌反应过夜，旋蒸除去溶剂，产物过硅胶柱纯化，其中二氯甲烷：甲醇＝9:1，得2-氯腺嘌呤核苷；将2-氯腺嘌呤核苷与一水合肼室温搅拌反应10h，旋蒸除去未反应的肼，产物过硅胶柱纯化，其中二氯甲烷：甲醇＝5:1，得2-肼基腺嘌呤核苷；将2,2-二甲酰基乙酸甲酯加入2-肼基腺嘌呤核苷的乙醇混悬液中回流反应2h得缩合产物；经硅胶柱纯化，其中二氯甲烷：甲醇＝5:1，的缩合产物加入1.0M氢氧化钾甲醇溶液中室温搅拌反应12h，酯键断裂得羧酸衍生物；羧酸衍生物与N-叔丁氧羰基-乙二胺缩合得叔丁氧羰基保护的产物Reg-NH₂-Boc；Reg-NH₂-Boc在三氟乙酸和二氯甲烷1:1的溶液中搅拌反应4h，脱保护得Reg-NH₂，Reg-NH₂在甲醇中重结晶纯化；

步骤2：制备参比探针IR783-Den-(PEG)x

将载体材料Den溶于1X PBS(pH 7.4)中，滴加入聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯的DMF溶液，室温搅拌反应2h，将反应液用截留分子量为10kDa的超滤管超滤纯化3次，除去原料和副产物，浓缩液冷冻干燥得Den-PEG；适量Den-PEG溶于0 5 M 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液(HEPES，pH 8.3)中，逐滴加入IR783-N-羟基琥珀酰亚胺酯(IR783-NHS)的DMF溶液，室温搅拌反应2h，将反应液用截留分子量为10kDa的超滤管超滤纯化3次，除去原料和副产物，浓缩液冷冻干燥得绿色产物即为参比探针IR783-Den-(PEG)_x，x代表修饰在探针上PEG基团的数目；

步骤3：制备目标探针IR783-Den-(PEG-Reg)x

Reg-NH₂溶于无水DMF中.加入三乙胺(TEA)，与溶于DMF的Mal-PEG-NHS混合，室温搅拌反应2h；IR783-Den-PEG溶于0 5 M 4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液(HEPES，pH 8.3)中，将DMF混合液滴入此溶液中，室温搅拌反应过夜；将反应液用截留分子量为10kDa的超滤管超滤纯化3次，除去原料和副产物，浓缩液冷冻干燥得绿色产物即目标探针IR783-Den-(PEG-Reg)x。

4.权利要求1的修饰腺苷受体激动剂纳米探针在制备有序调控血脑屏障开启时间窗口中的用途。

5.按权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的有序调控血脑屏障开启时间窗口是根据不同药物的药动学性质，调节血脑屏障开启的时间窗口，实现不同类型药物或诊断试剂跨血脑屏障递送。