[发明专利]一种“胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向共传递体的制备及应用

权利要求书

1.一种“胞内触发”式还原敏感型药物联合基因靶向传递体，其特征是，所述传递体是化学药物和基因联合给药的纳米粒传递系统；聚合物可通过二硫键交联，并且在其表面通过主动靶向基团包被进行修饰。 

2.根据权利要求1所述传递体中二硫键的引入包含但不局限于二硫代二丙酸丁二酰亚胺酯，二甲氧基-二硫代丙基亚胺盐酸盐，N，N’-胱胺双丙烯酰胺。 

3.根据权利要求1所述传递体中主动靶向基团的修饰可以是多糖类如透明质酸、甘露糖等，或者多肽蛋白类如RGD序列、转铁蛋白等。其中靶向基团的修饰可以是共价键键合或者非共价键键合。 

4.如权利要求1中所述的传递体，其特征是聚乙烯亚胺(polyethylenimines，PEI)或二硫键交联的聚乙烯亚胺(PEIss)与聚丙交酯乙交酯共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)质量比为1：1-1：60，其中主动靶向基团的分子量为3000道尔顿～150万道尔顿；聚乙烯亚胺(或二硫键交联的聚乙烯亚胺)分子量范围为600道尔顿～70,000道尔顿；聚丙交酯乙交酯共聚物分子量范围为5000道尔顿～10,000道尔顿，其中丙交酯：乙交酯的比例为25：75～75：25。 

5.权利1中所要求的二硫键交联型低分子量聚乙烯亚胺制备方法，包括以下步骤： 

(1)将聚乙烯亚胺和交联剂按照一定摩尔比例分别溶于适当的反应溶剂中，一定温度、避光、氮气保护条件下搅拌反应一定时间。 

(2)反应结束后，将反应溶液于适当透析液中透析纯化，冷冻干燥即得二硫键交联的聚乙烯亚胺共聚物。 

6.如权利要求5中所述的制备方法，其反应溶剂可以是惰性溶剂，如DMSO、DMF、甲醇、水，优选甲醇-水(80％)；反应要求在避光、氮气保护条件下进行。交联剂与聚乙烯亚胺的摩尔比例范围为1：4～1：1，反应温度范围为室温～60℃，反应时间为24～120h，透析液为水或无机盐类，干燥采用冷冻干燥法。 

7.权利1中所要求的纳米粒传递体的制备方法，包括以下步骤： 

(1)将聚丙交酯乙交酯共聚物和疏水性小分子药物、聚乙烯亚胺(PEI)或二硫键交联的聚乙烯亚胺(PEIss)按照一定的质量比分别溶于适当的有机溶剂或水性溶剂中，并加入一定比例的吐温-80。将上述溶液混合均匀后缓慢加入到一定浓度表面活性剂的水性溶液中。于冰水浴条件下，运用超声波细胞粉碎仪间断超声数分钟后，于旋转蒸发仪上减压蒸掉有机溶剂，得到载小分子药物的PLGA-PEI纳米粒或PLGA-PEIss纳米粒。以不同N：P将纳米粒与基因混合均匀，室温孵育一定时间后通过静电自组装形成基因-小分子药物双载药PLGA-PEI或PLGA-PEIss复合物溶液。 

(2)将主动靶向小分子物质溶于去离子水中配制成10％(W/V)的溶液，在搅拌条件下将该溶液与双载药纳米粒混合，室温避光搅拌24h，得主动靶向基团修饰的PLGA-PEI纳米粒或PLGA-PEIss纳米粒。 

8.根据权利要求7所述的制备方法，聚丙交酯乙交酯共聚物和聚乙烯亚胺或二硫键交联的聚乙烯亚胺质量比范围为5：1-60：1；聚丙交酯乙交酯共聚物浓度范围为0.1mg/ml-10mg/ml；吐温-80浓度范围为0.01％-1％；表面活性剂的种类为：泊洛沙姆188，聚乙烯醇，浓度范围为0.1％-5％。 

9.根据权利要求7所述的共传递体其特征在于粒径小于2μm。 

10.根据权利要求7所述方法，其特征在于溶解共传递体的溶媒为磷酸盐缓冲液、HEBS(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)缓冲液、氯化钠溶液或葡萄糖溶液；PLGA-PEI纳米粒或PLGA-PEIss纳米粒与基因的浓度范围 为0.01mg/ml-10mg/ml，N：P比范围为1：1-1：100；主动靶向小分子物质与聚乙烯亚胺或二硫键交联的聚乙烯亚胺的摩尔比范围为1：10-10：1；疏水性小分子药物的载药量为1％-10％。 

11.根据权利1的要求所述的疏水性小分子药物包括紫杉醇、多西他赛、阿霉素等抗肿瘤药物以及激素类药物、中药单体等。 

12.根据权利1的要求所述的基因可以是含报告基因、抗癌基因、细胞因子基因能在真核细胞中重组表达的质粒DNA，寡聚核苷酸或是小干扰RNA。