[发明专利]一种油茶组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养技术，具体地说，涉及一种油茶组织培养快速繁殖方法。

背景技术

油茶（Camellia oleifera）是山茶科（Theaceae）山茶属（Camellia）植物，是我国特有的优质木本油料树种，与油橄榄、油棕和椰子并称为世界四大木本油料树种。茶油营养丰富，色清味香，耐贮藏，是优质食用油之一，被誉为“东方橄榄油”，同时副产物还是生产化肥、农药、药品的优质原料。随着人类生活水平的提高，油茶营养价值被广泛认知，茶油市场需求空间的急剧增加，然而，目前的茶油产量远远不能满足人们日常生活的需要，油茶低产低效严重制约产业的发展。油茶低产低效的重要原因之一就是良种化程度低，优良品种亩产茶油可达75kg以上，是现有林分产量的10倍以上，而目前油茶的优良品种有200多个，如何将这些油茶良种尽快应用于生产，从而提高整个油茶产业的产量水平，育苗技术和产业化水平是关键。目前，油茶种苗繁育主要采用芽苗砧嫁接育苗，但芽苗砧嫁接育苗出圃时间长，而且受育苗季节的限制，难以满足全国油茶产业发展对油茶优良无性系的要求，油茶组织培养快速繁育成为必然趋势。

油茶属于喜干旱植物，根系在不透气的情况下较难生根，因此油茶组织培养普遍面临生根困难的技术瓶颈，虽然采用瓶外生根的方法能提高生根率，但由于细菌等污染较为严重，不能满足基因改良过程中如转基因等操作的要求；同时油茶品种繁多，在不同品种生长习性方面有差异，因此不同品种之间各个阶段的培养基成分及处理都有很大的差异，利用现有技术培育‘华硕’等近年选育的品种不能达到预期的效果，更不能满足工厂化育苗的要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种油茶组织培养快速繁殖方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种油茶组织培养快速繁殖方法，包括外植体消毒、初代培养、继代增殖培养、生根培养和移栽的步骤。其中，生根培养使用的生根培养基，其制备方法为：配制含0.5mg/L IBA的1/2MS琼脂培养基，其中琼脂为7-10g/L，pH值5.0-5.5（优选7g/L，pH值5.5），用网兜包好粉碎的珍珠岩，放入融化的培养基中，待珍珠岩充分吸收培养基后，稍沥干，灭菌，即得。

外植体消毒具体为：取油茶新稍抽出5-10cm，叶片数4-6片的枝条作为外植体，用水冲洗8-15min，然后浸泡于75%酒精中10-60s，用水冲洗后，再用0.1%HgCl₂处理2-4min，最后用无菌水冲洗3-5遍。

初代培养具体为：将消毒好的外植体接入初代培养基中，暗培养1-3d后，在光照条件下培养20-25d，培养温度为26士1℃。所述初代培养基为：MS+1-4mg/L6-BA+0.05-0.2mg/L IAA+30g/L蔗糖+琼脂7-10g/L，pH5.4-5.8。优选6-BA为2mg/L，IAA为0.05或0.2mg/L。

前述光照条件为：光照强度1800-2000lx，光照时间14-16h/d。

继代增殖培养具体为：将初代培养的外植体的无菌组织茎段切下接种到继代培养基中，进行不定芽的继代增殖培养；培养条件为：暗培养1-3d后，在光照条件下培养25-30d；培养温度为26士1℃。所述继代培养基为：MS+2-4mg/L6-BA+0.05-0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖+琼脂7-10g/L，pH5.4-5.8。优选6-BA为2-3mg/L，IBA为0.05-0.1mg/L。

前述光照条件为：光照强度1800-2000lx，光照时间14-16h/d。

生根培养具体为：继代增殖培养后，取长至2-3cm的无菌苗进行生根培养，将无菌苗插入生根培养基中进行培养，培养温度为26士1℃；先进行暗培养5-7d，然后在光照条件下培养至生根，光照强度为1800-2000lx，光照时间14-16h/d。

移栽具体为：生根培养12-16d后，将无菌苗转移到泥炭土、珍珠岩和油茶专用肥按6:3:1的体积比混合的基质中，覆盖薄膜，保持湿度80%以上，温度27-28℃，12-18d后移栽至常温大棚或圃地中。

上述油茶组织培养快速繁殖方法特别适用于油茶品种‘华硕’。