[发明专利]一种视网膜高趋化性的大鼠视网膜小胶质细胞系

说明书

本发明属微生物动物细胞系领域，涉及一种视网膜高趋化性的大鼠视网膜小胶质细胞系及其建立方法。本细胞系为鼠源性细胞，与原代培养的视网膜小胶质细胞有不到1%的基因差异且均不涉及主要功能蛋白；能自我增殖，连续传代；能表达单核‑巨噬细胞表面抗原CD11b(OX42),ED1(OX6)、具有吞噬能力并且在LPS的刺激下能分泌TNF‑а、IL‑1β与iNOS等致炎因子；经体内移植后能被高效定向募集到视网膜损伤部位并存活，进一步促进光感受器存活。本发明细胞系可用于视网膜光感受器变性疾病的防治研究，并可作为从外周‑中枢（视网膜）的药物载体。

技术领域

本发明属微生物动物细胞系领域，涉及大鼠视网膜小胶质细胞系，具体涉及一种视网膜高趋化性的大鼠视网膜小胶质细胞系，尤其是一种能被高效募集到视网膜的大鼠视网膜小胶质细胞系及其建立方法。

背景技术

研究报道，视网膜退行性疾病是一大类严重的致盲性眼病，其中以视网膜色素变性（RP）、年龄相关性黄斑变性（AMD）最为常见。随着角膜病、白内障等可预防性和可治疗性盲的减少，这一类疾病已成为世界范围内致盲的主要眼病。虽然近年来对其发病机制及病理生理过程的研究使得人们对这一类疾病形成了更为深刻的认知，并视网膜及干细胞移植等方面都取得了一定的进展，然而医疗实践中依然无法从根本上实现“对因治疗”。 在致伤因素不能去除的情况下，如何延缓光感受器进行性变性、衰退的过程，依然是当今视网膜变性疾病防治研究领域中的热点。

近年来，作为CNS病理事件“传感器”的小胶质细胞（MG）的功能调控日益成为各国研究者关注的焦点。研究显示，在病理模型如脑缺血模型中，驻留型MG能够分泌转化生长因子-beta（TGF-beta）和胶质源性神经营养因子（GDNF），从而减轻神经元的缺血性损伤，给予外源性MG也能够增加缺血海马回部位GDNF和脑源性神经营养因子（BDNF）的表达，对受损神经元产生营养因子依赖性的保护作用；尤其值得一提的是，作为CNS游走巨噬细胞，MG在病理状态下受到损伤信号的趋化能迅速聚集到受损的神经元周围甚至可以从外周途径穿越血屏障进入CNS。在本申请已公开的前期工作中，发现强光照射引起光感受器凋亡，凋亡信号诱导视网膜MG向光感受器层聚集，那么是否可以利用MG这一天然的行为特征将其作为活的生物学工具，从而为视网膜光感受器变性疾病创建一个新颖却又安全可靠的从外周——中枢的功能细胞转运体系？

单核吞噬细胞包括MG的定向迁移能力受归巢受体的调控，其中又以CC-趋化因子受体2（CCR2）的作用最为重要。有研究在小鼠的多发性硬化的模型中发现，CCR2与单核巨噬细胞向脑内的浸润有关；CCR2对于巨噬细胞向海马回轴突损伤部位的募集是必需的；CCR2基因静默将阻碍MG的趋化聚集从而加速Alzheimer’s 病的进展。在已公开的体外研究中，成功构建了Lenti-CCR2载体并将其转染原代培养的大鼠视网膜MG，被转染的MG能大量表达CCR2蛋白并在体外趋化实验中显示出对CCL2的高趋化性。而在视网膜中，光感受器是CCL2的主要来源，损伤状态下其表达明显上升，成为吸引外源性MG进入损伤部位发挥生物学作用的关键因子。尽管有研究表明在从外周途径进入CNS的过程中，成熟的MG较巨噬细胞而言对神经组织具有更高的亲和力，然而从可行性方面考虑，从患者自身的视网膜分离获取MG再进行外周移植是不现实的，因此需要寻找其他替代细胞来源。由于小胶质细胞在体外培养环境中无法自我增殖，建立功能细胞转运体系的另一个瓶颈就是缺乏足够的细胞数量，现有技术已公开的小胶质细胞系有BV2、N9等，但其来源均为大脑组织，因此建立可靠的视网膜来源的能自我增殖并向视网膜高趋化的小胶质细胞系是当务之急。

发明内容

本发明的目的是提供一种能被高效募集到视网膜的鼠视网膜小胶质细胞系——T-MG。本发明的视网膜高趋化性的小胶质细胞系能用于视网膜光感受器变性疾病的防治研究。