[发明专利]一种诱导茄子花药再生单倍体植株的方法

权利要求书

1.一种诱导茄子花药再生单倍体植株的方法，其步骤是：

1）从茄子花蕾发育期开始，于晴天上午9:00-10:00从植株上选取发育正常，表面无损伤，经显微镜镜检小孢子处于单核中期至单核靠边期的花蕾用于花药培养，对应花蕾外部形态为花冠低于花萼裂基部1-2 mm至花冠高于花萼裂基部1-2mm，花药为黄绿色；

2）将花蕾装于自封袋内置于4-5℃冰箱预处理24 -72 h；

3）将花蕾外萼剥掉，用75%体积百分比的酒精表面消毒28 -32 s，之后用5%质量百分比的次氯酸钠溶液消毒15 -20 min，然后用无菌水冲洗3-4次；

4）在无菌滤纸上用镊子剥取花药，将花药柄去除干净，接种于装有愈伤组织诱导培养基的培养皿中，每皿接种3-5个花蕾的花药；

5）花药接种后，置于35-37℃高温黑暗条件下处理6 -7 d；

6）在光照强度1500 -2000 1x、光照时间12 -16 h、温度25-28 ℃下继续培养，3周产生愈伤组织；

7）待愈伤组织长到直径为5 -6 mm 时，切下并接种到愈伤组织增殖培养基上培养增殖；

8）两周后，选取大小一致，色泽新鲜，淡黄色，质地紧密的愈伤组织转移至愈伤组织分化培养基上，诱导不定芽发生；

9）待芽苗长至1 -3 cm长时，切下无根小苗，转接到植株扩繁与继代培养基上，每30 d扩繁继代一次；

10）根据育种需求和外界环境条件，在移栽大田前1个月将无根小苗转移至生根培养基上，诱导生根，再生出完整植株。

2.根据权利要求1所述的一种诱导茄子花药再生单倍体植株的方法，其特征在于：

    所述的愈伤组织诱导培养基为：MS基本培养基，0.5 mg/L 2，4-D ，1.0 mg/L KT，30.0 g/L蔗糖，7.5 g/L琼脂，加水至1L，灭菌前调整培养基的pH至5.8-6.0；

    所述的愈伤组织增殖培养基为：MS基本培养基，30.0 g/L蔗糖，7.5 g/L琼脂，加水至1L，灭菌前调整培养基的pH至5.8-6.0；

所述的愈伤组织分化培养基为：MS基本培养基，0.01 mg/L NAA ，2.0 mg/L ZT，20.0 g/L蔗糖，7.5 g/L琼脂，加水至1L，灭菌前调整培养基的pH至5.8-6.0；

所述的植株扩繁和继代培养基为：MS基本培养基，0.01 mg/L NAA，2.0 mg/L 6-BA，20.0 g/L蔗糖，7.0 g/L琼脂，加水至1L，灭菌前调整培养基的pH 至5.8-6.0；

    所述的生根培养基为：1/2MS，0.2 mg/L IBA，30.0 g/L蔗糖，7.0 g/L琼脂，加水至1L，灭菌前调整培养基的pH至5.8-6.0。