[发明专利]一种抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉及其制备方法

权利要求书

1.一种抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉，其特征在于：包括以下重量份数的组分：抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联卵黄抗体94～97份，抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联转移因子1～2份，防腐剂0.01～0.02份，灭活剂0.2～0.3份，硒0.05～0.1份，维生素C0.5～1份，聚乙烯吡咯烷酮1～2份，甘氨酸0.5～1份。

2.根据权利要求1所述的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉，其特征在于：所述灭活剂为甲醛。

3.根据权利要求1所述的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉，其特征在于：所述防腐剂为硫柳汞。

4.一种如权利要求1所述的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：

a.采用鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感病毒标准株制备四联疫苗，免疫健康鸡群获得高免蛋，将高免蛋经过消毒、酸化处理、离心处理得到含有抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联卵黄抗体的上清液；

b.将含有抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联卵黄抗体的上清液与抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联转移因子、防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再冻干即得。

5.根据权利要求4所述的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：

1）取鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感病毒标准株进行增殖，将其灭活制备成四联疫苗，每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫，一共免疫三次，第二次免疫后开始检测抗体效价，当抗体效价达到1：256时，收集高免蛋，将收集的高免蛋进行清理、消毒，晾干备用；

2）将步骤1）所得高免蛋分离得到高免蛋卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌，得到卵黄抗体溶液，在卵黄抗体溶液中加入酸化水溶液，混匀、静置沉淀，取上清液备用；

3）在步骤2）所得上清液中加入钠盐使钠盐体积占总体积的0.8%，离心分离，得含有抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联卵黄抗体的上清液；

4）取步骤3）所得的含有94～97重量份的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联卵黄抗体的上清液，加入1～2重量份抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联转移因子，过滤，留滤液备用；

5）将步骤4）所得滤液浓缩至2.5ml/500羽份，加入防腐剂0.01～0.02重量份、灭活剂0.2～0.3重量份、硒0.05～0.1重量份、维生素C0.5～1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1～2重量份、甘氨酸0.5～1重量份进行混合，先-20℃预冷，再在-80℃条件下冻干，即得。

6.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤2）中所述酸化水溶液的pH为4.9～5.2；酸化水溶液的加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍。

7.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤3）中所述钠盐为NaCl与NaSO4的质量比为4:1的混合物。

8.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤3）中所述离心分离的转速为15000rpm，时间为20min。

9.根据权利要求5所述的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤4）中所述过滤是先用0.45μm的滤膜进行过滤，截留分子量大于200KD的大分子，再将滤液用0.22μm的滤膜过滤。

10.根据权利要求4或5所述的抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感的混合冻干粉的制备方法，其特征在于：所述抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联转移因子，是由以下方法制备的：

1）用鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感病毒抗原对猪脾脏和/或胸腺进行免疫后，去其表面筋、脂肪，再用灭菌后的生理盐水冲洗；

2）将冲洗后的猪脾脏和/或胸腺破碎后，加入2倍体积的预冷后的PBS缓冲液，用组织匀浆仪将其匀质，得匀浆液；

3）将匀浆液用超声破碎仪处理5～10min后，调节pH为5.5，在5000～6000rpm转速下离心30min，收集上清液；

4）将步骤3）所得上清液用微滤膜过滤，截留分子量为7000道尔顿以上的物质，将所得滤液用除菌滤膜过滤，即得抗鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症、禽流感四联转移因子原液，在4℃条件下保存备用。