[发明专利]鸡滑液囊支原体灭活疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种鸡滑液囊支原体灭活疫苗的制备方法，其特征在于其制备抗原用基础培养基及成品培养基制备方法：

 (1)基础培养基成分：PPLO肉汤20.0～25.5g、水解乳蛋白5～8 g、酵母浸出粉3～7g、烟酰胺0.3 g、质量浓度为0.4%的酚红溶液2ml、去离子水700～800ml。

2.(2)成品培养基制备方法：将上述（1）培养基成分121℃高压灭菌15分钟，冷却后加入滤过除菌的150-200ml猪血清和1000单位/ml青霉素，20%NaOH调PH7.6～7.8，无菌分装，2～8℃保存备用。

3.一种鸡滑液囊支原体灭活疫苗的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将鸡滑液囊支原体按1：10的比例接种于鸡滑液囊支原体成品培养基中，在36～37℃培养24～48h收获作为一级种子液；以同样方法将一级种子液按1：10的比例再接种传代1次收获作为二级种子液；

（2）采用机械搅拌发酵罐连续增菌培养鸡滑液囊支原体菌液：先将发酵罐中鸡滑液囊支原体基础培养基成分进行灭菌，待温度降至37～38℃时，按1：5～1：10的比例接种鸡滑液囊支原体二级种子液。

4.调节PH、补料，采用连续增菌培养方式，PH为7.6～7.8，37℃恒温培养，罐压为0.03～0.05Pa，溶氧量为40%，待PH下降至6.5左右，添加基础培养基为原培养体积的30%，用20%NaOH调PH7.6～7.8，如此进行两次增菌培养，待第二次增菌培养PH下降到6.4时，加甲醛溶液灭活，连续增菌培养结束，留样检验，置2～8℃保存，不超过2日。

5.（3）根据活菌计数结果，鸡滑液囊支原体菌液浓度达到10⁸～10⁹CCU/mL;

（4）所述鸡滑液囊支原体灭活疫苗的配制与疫苗乳化：取96份灭活菌液，加入4份吐温-80，混匀后作为水相溶液备用；取96份注射用白油，加入4份司本-80，混匀后作为油相溶液备用；将油相溶液和水相溶液按照体积比2.8～3.5:1混和均匀，即获得所述鸡滑液囊支原体灭活疫苗。