[发明专利]一种新琼二糖水解酶及其应用

说明书

技术领域

本发明属于功能基因筛选技术领域，具体涉及一种新琼二糖水解酶及应用。

技术背景

新琼二糖水解酶是一种降解新琼二糖的水解酶，水解断裂新琼二糖的α-1,3键，生成L-3，6-内醚半乳糖(L-AHG)和D-半乳糖。新琼二糖是某些琼胶酶水解琼胶的水解产物。L-AHG自然存在是作为琼脂糖中L-AHG和半乳糖的更替单元的一个单体，而琼脂糖是红色巨藻的主要组成成分(Rhodophyta)。迄今为止，即使是以试剂的形式，L-AHG没有市售，亦没有化学合成的报道。L-AHG作为内醚糖的一种，有很好的美白和抗炎活性，在医药和化妆品方面有很好的潜在应用价值。新琼二糖水解酶作为一种的可以生产L-AHG的生物催化剂，因其反应环境友好，催化活性高，对比化学方法有着一定优势，其具有良好的应用潜力和前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新琼二糖水解酶及其应用，从而弥补现有技术的不足。

本发明的新琼二糖水解酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1；

编码上述新琼二糖水解酶的基因，其一种核苷酸序列为SEQ ID NO:2；

本发明还提供一种重组表达载体，用于表达氨基酸序列为SEQ ID NO:1的新琼二糖水解酶；

本发明的新琼二糖水解酶用于降解新琼2糖来制备L-3，6-内醚半乳糖。

本发明的新琼二糖水解酶能够降解新琼二糖产生L-3，6-内醚半乳糖(L-AHG)和D-半乳糖，因此可以用于纯的L-3，6-内醚半乳糖的制备。新琼二糖水解酶作为一种可以生产L-AHG的生物催化剂，因其反应环境友好，催化活性高，对比化学方法有着较大优势，其具有良好的应用潜力和前景；该方法不仅避免了传统制备方法中强酸的使用带来的环境污染，而且避免了强酸过度降解L-AHG产生5-羟基-甲基糠醛（HMF）等毒副产物，因此，具有重要的开发价值。L-AHG作为内醚糖的一种，有很好的美白和抗炎活性，在医药和化妆品方面有很好的潜在应用价值。

附图说明

图1：本发明的新琼二糖水解酶亲和层系后的纯酶SDS-PAGE电泳图，M为Marker。

图2：本发明的新琼二糖水解酶水解产物TLC结果，表明新琼二糖被水解为L-3，6-内醚半乳糖和D-半乳糖新琼四糖被水解为L-3，6-内醚半乳糖和琼三糖；其中1为新琼二糖水解产物，2为新琼四糖水解产物。

图3：本发明的新琼二糖水解酶，pH变化对相对酶活的影响（数据均为最少三次重复取平均值）

图4：本发明的新琼二糖水解酶，温度变化对相对酶活的影响（数据均为最少三次重复取平均值），◆代表热稳定性，■代表最适温度。

具体实施方式

下面结合实例对本发明的方法做进一步说明。但实施例中所用到的实验条件可以根据已有技术进行选择。对于实施例中未注明具体条件的实验方法，通常可按常规条件，如J.萨姆布鲁克（Sambrook）等编写的《分子克隆实验指南》中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件运行。

对于本发明中的术语解释如下:

1、新琼二糖水解酶：糖苷水解酶，以新琼二糖为底物水解，产物为L-3，6-内醚半乳糖(L-AHG)和D-半乳糖两种单糖。

2、新琼2糖：两种单糖L-3，6-内醚半乳糖（AHG）和D-半乳糖（D-Gal）α-1,3键连接形成的二糖。

3、L-3，6-内醚半乳糖：3，6位羟基脱水形成内醚键的L型半乳糖。

实施例1新琼二糖水解酶基因的克隆