[发明专利]一种β-琼胶酶及其应用

说明书

技术领域

本发明属于功能基因筛选技术领域，具体涉及一种β-琼胶酶及其应用。

背景技术

研究发现海洋红藻细胞壁由两种不同的组份——琼脂糖和琼脂胶组成。其中琼脂糖是两种单糖的聚合物，是由L-3，6-脱水半乳糖（AHG）和D-半乳糖（D-Gal），以交替的1，3糖苷键和1，4糖苷键连接形成的。新琼寡糖作为琼胶酶水解琼脂胶或者琼脂糖的产物,拥有多种的生物功能，在食品化妆品和医药工业方面具有潜在的应用价值。琼胶酶是降解琼脂胶为寡糖的水解酶，依据水解位点的不同，琼胶酶被分α-琼胶酶(E.C.3.2.1.158)和β-琼胶酶(E.C.3.2.1.81)，α-琼胶酶(E.C.3.2.1.158)断裂α-1,3键来产生琼寡糖；β-琼胶酶(E.C.3.2.1.81)断裂β-1,4键产生新琼寡糖。但至今为止大部分的β-琼胶酶，都只能产生新琼寡糖的系列产物，不能产生单一聚合度的寡糖，因此，筛选出一种能够产生单一聚合度寡糖的β-琼胶酶就具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种β-琼胶酶及其应用，即一种能够降解琼脂糖产生单一的新琼2糖的β-琼胶酶，从而弥补现有技术的不足。

本发明的β-琼胶酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1；

用于编码上述β-琼胶酶的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO:2；

本发明还提供一种重组表达载体，用于表达上述的β-琼胶酶；

本发明的β-琼胶酶用于降解琼胶制备新琼2糖。

本发明的β-琼胶酶能够降解琼脂糖产生单一的新琼2糖，因此可以用于纯的新琼2糖的制备。本发明的β-琼胶酶具有良好的生物催化活性，相对其它已知的大部分β-琼胶酶其特点为在反应过程中从始至终均只有单一的新琼2糖产生，这使得其产物中掺杂其他聚合度的新琼寡糖的量非常少，其产物新琼2糖纯度>90%，产率为约为60%。

附图说明

图1:本发明的β-琼胶酶亲和层系后的纯酶SDS-PAGE电泳图，M为Marker。

图2:本发明的β-琼胶酶，温度变化对相对酶活的影响（数据均为最少三次重复取平均值），◆代表热稳定性，■代表最适温度。

图3:本发明的β-琼胶酶，pH变化对相对酶活的影响（数据均为最少三次重复取平均值）

图4:本发明的β-琼胶酶，酶解产物的质谱图，

图5:本发明的β-琼胶酶，酶解产物的碳谱核磁图。

具体实施方式

下面结合实例对本发明的方法做进一步说明。但实施例中所用到的实验条件可以根据已有技术进行选择。对于实施例中未注明具体条件的实验方法，通常可按常规条件，如J.萨姆布鲁克（Sambrook）等编写的《分子克隆实验指南》中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件运行。

对于本发明所涉及的术语解释如下：

1、β-琼胶酶：糖苷水解酶，一类水解琼脂糖β-1,4键产生新琼寡糖。

2、新琼2糖：两种单糖L-3，6-脱水半乳糖（AHG）和D-半乳糖（D-Gal）α-1,3键连接形成的二糖。

实施例1 β-琼胶酶基因agWH50C的克隆