[发明专利]原因不明性男性不育症的生物标志物及其应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物标志物，特别是涉及原因不明性男性不育症的生物标志物，包含用于鉴定和筛选原因不明性男性不育症的生物标志物的方法，包含用于检测这些生物标志物的方法，还包含用于诊断或检测原因不明性男性不育症的试剂盒。 

背景技术

据世界卫生组织预测，在本世纪，不孕症将成为仅次于肿瘤和心脑血管疾病的第三大疾病。在已婚夫妇中不孕不育症的发生率为10-20%，由男性因素引起的不孕不育症的比例约为50%，而在男性不育患者中，50%是由生精过程异常而导致的少精子、弱精子和畸精子症。我国人口和计划生育委员会的研究结果表明，我国男性的精液质量正以每年1%的速度下降，而精子数量的降幅更是高达40%。男性不育已经成为我国目前面临的重大公共健康问题，男性不育的病因和发病机制的研究将成为男性科学中的重点和热点。 

目前在临床中使用最广泛的判断男性生育力的手段是精液常规分析，包括精子数量、存活力、活动率和形态等指标，但是仅仅依靠精液常规分析来预测男性生育状况仍是很不准确的(N Engl J Med, 2001, 345: 1388-1393; Reproduction, 2007, 13: 675-684; Clinics, 2011, 66: 691-700; Asian J Androl, 2010, 13: 53-58)。而且，虽然有些男性患者的常规精液分析结果均处于正常值范围，但是仍然不育，这类人群占到男性不育症的近30%，被称为原因不明性男性不育症，长期以来临床对这类男性不育的诊断存在很大的困难。主要原因是精子数量、存活力、活动率和形态等常规精液分析指标只能反映最基本的精液质量，而不能反映所有的精子功能，因此探索新的生物标志物以辅助传统的精液常规分析，实现对男性不育症的准确诊断尤为重要。 

2006年，Agarwal首次利用氧化应激生物标记物对来自5组研究对象(包括4组男性不育病人与1组正常对照)的精浆标本进行了测评，结果表明氧化应激生物标记物能作为一种有效的诊断各种形式男性不育的快速、非侵入性的方法(Fertil Steril, 2006, 86: S180)。Maher等通过对比脊髓损伤后不育症的男性患者和对照组精浆的差异，发现胆碱、N-乙酰氨基葡萄糖和尿苷等重要标志物(Anal Chem, 2008, 81: 288-295)。代谢标志物也被成功应用于不育症患者前列腺组织的差异分析(Hum Reprod, 2010, 25: 847-852)。以上所述都提示相关生物标志物在男性不育的鉴别诊断方面具有潜在的临床价值。但是，到目前为止，还未有原因不明性男性不育症方面的报道。另外，诊断中所需的组织切片常常会对患者身体造成一定的损伤，精液样品的取样过程也比较繁琐和困难，甚至由于其特殊性可能会被某些患者排斥，因此，发现体液中生物标志物以及发展简单、非侵入性的检测方法显得极为重要和紧迫。 

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种诊断原因不明性男性不育症的方法，一般涉及体液样品的分析性测试。在一些方面中，包含了用于指示原因不明性男性不育症的生物标志物，包含用于鉴定和检测生物标志物的方法，还包含用于诊断或检测原因不明性男性不育症的试剂盒。本发明作为一种诊断方法，可实现对原因不明性男性不育症的简单、准确和非侵入性的诊断。 

在本发明的一个方面中，本文提供了一种诊断原因不明性男性不育症的方法，包括： 

（a）提供男性受试者体液样品，体液样品选自受试者尿液、血清、血浆、血液、精液、精子、精浆、唾液；

（b）体液样品经过必要的前处理，包括使其保持液体状态、稀释、离心、过滤、固相萃取等操作；

（c）通过液相色谱-质谱联用技术或酶联免疫方法测定受试者体液中生物标志物-白细胞三烯E4、羟基棕榈酰肉碱、天冬氨酸、黄苷、甲氧色氨酸的水平，并将一种或两种或多种任意组合的生物标志物水平与所对应的参考水平进行比较，其中所述至少一种生物标志物的水平与参考水平的差异指示该受试者患有原因不明性男性不育症。

在一个实施方案中，参考水平是指正常生育男性受试者对照群体中对应的所述体液中对应的所述至少一种生物标志物的水平。 

在一个实施方案中，所述男性受试者不局限于人类，还包括所有的哺乳动物。 

在一个实施方案中，所述酶免疫测定是指固相酶联免疫测定（ELISA）。 

在本发明的另一方面，本文提供了一种用于鉴定和检测指示原因不明性男性不育症生物标志物的方法，其特征在于：该方法包括：