[发明专利]一种脱氧胆酸基-氧化可德兰多糖纳米粒子及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种脱氧胆酸基-氧化可德兰多糖纳米粒子及制备方法，特指将水不溶性的可德兰多糖用4-乙酰胺-2,2,6,6-四甲基哌啶氧自由基进行选择性氧化，再用活化的脱氧胆酸与氧化可德兰多糖偶联形成脱氧胆酸基-氧化可德兰多糖共聚物，以及该共聚物多糖纳米粒子的制备方法，属于生物纳米材料技术领域。

背景技术

肿瘤是对人类健康和生命威胁最大的疾病之一，但是由于传统的抗肿瘤药物缺乏选择性，在治疗肿瘤的同时也对正常组织造成一定的毒副作用，从而限制了抗肿瘤药物的临床使用剂量。为了有效地治疗肿瘤，理想的抗肿瘤制剂必须有选择性，保证一定的药物治疗浓度并能够降低毒副作用等。随着纳米科学技术研究的不断深入，负载抗肿瘤药物的纳米给药系统正成为攻克这一难题的有效手段。

随着新材料、新方法、新技术的不断涌现，基于合成聚合物和天然高分子材料(尤其是可生物降解的多糖)制备纳米粒子得到广泛的关注。多糖是自然界丰富的天然高分子聚合物，许多多糖还具有抗肿瘤、免疫调节、抗病毒和抗氧化等多种生理活性，因此对多糖及其衍生物进行修饰形成两亲性共聚物在医药和生物技术领域有着广泛的应用。可德兰多糖（Curdlan）作为一种天然高分子聚合物，有着良好的生物相容性、可生物降解性、无毒性等特点，可通过化学反应引入各种改性基团，形成不同化学结构、不同性质和功能的衍生物。羧甲基取代是提高许多多糖水溶性和功能特性的方法，可德兰多糖的羧甲基衍生物有着良好的水溶性和抗肿瘤活性。目前，国内外科技工作者已通过疏水改性制备了两亲性羧甲基可德兰多糖衍生物(Carboxymethyl curdlan)共聚物，并制备了纳米粒子用于抗肿瘤药物载体。然而，在可德兰多糖进行羧甲基化反应过程中使用的氯乙酸为易挥发、有毒的有机试剂，不符合“绿色”化学的要求。

近年来，利用稳定的2,2,6,6-四甲基哌啶氧自由基(TEMPO)及其衍生物来催化伯位羟基的氧化，已成为选择性氧化多糖伯羟基的一种重要的新方法。利用该氧化体系已经成功地制备了高水溶性和高羧基含量的C-6位氧化的可德兰多糖衍生物（Tamura et al., Carbohydrate Polymers, 2010, 81: 592-598.）。脱氧胆酸是一种内源性生理物质，生物相溶性好，具有两亲性，在水中可自组装形成胶束。但是，脱氧胆酸与氧化可德兰多糖共聚物，通过超声法制备纳米粒子作为抗肿瘤药物载体的研究尚未见任何文献或专利报道。

发明内容

 本发明的目的在于提供一种脱氧胆酸基-氧化可德兰多糖纳米粒子及制备方法。本发明是一种新型，绿色，价廉易得，可规模化生产的纳米载体，并可用于抗肿瘤药物的包载，降低毒副作用，提高靶向性。

本发明提供的一种脱氧胆酸基-氧化可德兰多糖纳米粒子，它是以氧化可德兰多糖、脱氧胆酸为原料，脱氧胆酸的羧基经1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）首先活化再与氧化可德兰多糖反应合成。

以醋酸钠缓冲液为可德兰多糖和4-乙酰胺-2,2,6,6-四甲基哌啶氧自由基反应，反应液在过量95%乙醇中沉淀，离心收集沉淀，水中溶解，透析，冷冻干燥得到氧化可德兰多糖；脱氧胆酸在无水二甲基亚砜中用1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化，再与氧化可德兰多糖反应，产物在95%乙醇中沉淀，离心收集沉淀，水中溶解，透析，冷冻干燥；最后水中分散，振摇，超声，经微孔滤膜过滤，即得自组装纳米粒子。

本发明提供的一种脱氧胆酸基-氧化可德兰多糖纳米粒子及制备方法，按照下述步骤进行：

1）将可德兰多糖、4-乙酰胺-2,2,6,6-四甲基哌啶氧自由基和氯酸钠置于容器中，然后加入0.2 mol/L醋酸钠缓冲液,用磁力搅拌器充分混匀，置于35℃恒温水浴中，迅速加入次氯酸钠,反应4 h，加入过量95%乙醇沉淀，离心收集沉淀，水中溶解，透析，冷冻干燥，得到氧化可德兰多糖；其中所述的可德兰多糖、4-乙酰胺-2,2,6,6-四甲基哌啶、氯酸钠、次氯酸钠的摩尔比为6.0:0.45:6.0:1.0。

2）将脱氧胆酸溶于无水二甲基亚砜中，加入1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化剂进行羧基活化反应，室温下搅拌30 min；其中所述的脱氧胆酸、1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1.0:2.5:2.0。