[发明专利]一种梨树腐烂病抗性鉴定的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物病害抗性鉴定的技术领域，具体涉及一种梨树腐烂病抗性鉴定的方法。

背景技术

梨树是我国主要果树树种之一，我国南北方均可种植，目前发展面积，产量均具世界第一位。据统计，我国梨树面积100万公顷，产量1300万吨。

梨树在栽培过程中，病虫害种类繁多，危害严重。其中梨树腐烂病是梨树生产中第一大毁灭性病害，该病在我国主要梨产区均有分布，尤其是在易发生冻害的地区或年份，造成梨树死树死枝普遍，严重果园病株率高达70%-80%以上，对梨树产业构成严重威胁。

目前我国主栽品种库尔勒香梨、酥梨、雪花梨等多为高感品种。生产上均需要采取多种措施控制该病害的发生，目前采用化学防治，一般于萌芽前喷铲除性杀菌剂，发病后进行病斑刮治并结合涂抹高浓度化学药剂处理是主要的防病措施。但长期依靠药剂防治，难度逐年加大，且效果并不理想。若能推出高抗梨树腐烂病的优质品种，替代现有的大批感病品种，减少或不用化学药剂，将从根本上解决此病的防治问题，且可减少农药的使用，对环境、生态带来安全，并会显著提高经济和社会效益，有利于梨树产业的稳定与发展，是非常有意义的工作。而抗病育种的关键，就是要有抗原材料。而抗原材料的获得需要从大量梨树品种、梨树杂交组合或野生资源中发现和获取，再通过常规或分子育种富集培育，做进一步的筛选与利用。梨树腐烂病抗病性检测，目前国内采用自然调查的方法，自然调查会受到试验地区，试验果园，年份、气候等影响，一般很难反映特定材料的抗性实际水平，仅能作为抗性育种中的参考。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种梨树腐烂病抗性鉴定的方法，不仅简便、快速，且准确性和可靠性提高。

为实现上述目的，本发明采用技术方案如下：

一种梨树腐烂病抗性鉴定的方法，该方法按如下步骤进行：

（1）梨苗培育与准备：按照常规的土肥水管理及病虫害控制措施培育和管理梨苗。

（2）菌种培养：将室内低温保存的梨树腐烂病菌菌种接种在PSA培养基上，于20℃下培养7天，再用直径5mm打孔器打成菌饼备用。

（3）梨苗接种：接种时先对待接种梨苗的枝条表面消毒，再用直径5mm打孔器在枝条上打孔，将步骤（2）得到菌饼接种至枝条的孔中，再用脱脂棉沾无菌水缠绕，外用封口膜缠绕保湿培养。

（4）病情调查与评价：于接种后第30天，调查每个接种点发病情况，记录病斑扩展直径或长度、枝条死亡状况，按以下分级标准进行每个接种点的病情级数调查，并计算出每株的病情指数：

0级不发病

1级病斑长度在1cm以下

2级病斑直径在1-2cm之间

3级病斑直径在2-4cm之间

4级病斑直径在4cm以上或枝条死亡或叶片枯萎。

病情指数=[Σ(各级病点数×相应病级)／调查总点数×最高病级]×100

免疫（I）     0.00

高抗（HR）   0.00＜病情指数≤20.00

抗病（R）    20.00＜病情指数≤30.00

感病（S）    30.00＜病情指数≤40.00

高感（HS）    病情指数>40.00。

进一步，上述步骤（3）在接种时先对待接种梨苗的枝条表面用70%乙醇溶液或5%次氯酸钠溶液消毒，再用直径5mm打孔器在枝条上每间隔7-10cm打孔，打4个孔，孔深至木质部，每孔上各接一个菌饼，再用脱脂棉沾无菌水缠绕，外用宽1厘米左右的封口膜缠绕保湿培养。

进一步，上述步骤（3）梨苗接种于当年9-10月、第二年4-5月共进行2次。

进一步，上述步骤（2）菌种准备包括：将室内低温保存的梨树腐烂病菌菌种接种在PSA培养基上，置于培养箱中20℃下培养7天，再用直径5mm打孔器打成菌饼备用；其中，PSA培养基配方为：马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂15～20g，蒸馏水1000ml。

上述打孔器的尺寸为5mm。

本发明通过人工接种评价梨树抗病性，解决梨树抗病育种中高抗资源材料早期发现难与快速评价问题，为梨树抗腐烂病育种奠定基础。

本发明与自然发病调查比较，因为自然发病评价受菌源量、气候等多种因素影响，不利于抗病品种的筛选，本发明采用人工接种技术，为病原菌提供了很好的发病条件，保证了试验材料感染病菌的机会，使用本发明的方法能快速准确地进行梨树腐烂病抗性鉴定及筛选，使用该方法筛选出想要的高抗、抗病品种，因此准确性、可靠性提高。