[发明专利]一种生产抗CD20抗体的方法

说明书

本发明公开了一种培养动物细胞生产抗CD20抗体的方法，具体公开了其接种量、培养基配方及培养过程各控制参数。其中培养基为无血清培养基，因此在细胞培养过程中不会产生由血清带来的副作用，更有利于抗体的提取与纯化。利用本方法生产抗CD20抗体不同批次间的差异小、抗体的表达量高、生产成本低、安全性好。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种生产抗CD20抗体的方法。

背景技术

非霍奇金淋巴瘤（NHL）是临床最常见的恶性肿瘤之一,其中约85%为B细胞来源，其发病率和死亡率已居恶性肿瘤第5位。NHL对传统的治疗方法如化疗、放疗、免疫调节,有效率高,但复发率也高，再次治疗缓解率低，且毒副反应大,患者耐受性差。近十余年来,随着抗体药物的发展,以美罗华为代表的抗CD20单抗制剂极大改善了淋巴瘤的临床疗效。

目前，培养动物细胞制备抗体的方法中，多使用有含血清≥10%培养基才能使细胞正常生长。然而动物血清一方面会给细胞生长提供诸如激素，抗生素，微量元素等物质，另一方面，在补料的过程中会导致培养液PH变化大，储存过程中容易被微生物污染，以及不同批次的差异大，成本高。因此采用血清含量少或者无血清培养基培养动物细胞已成为一种趋势。

发明内容

本发明第一个目的是提供一种培养CHO细胞的培养基，所述CHO细胞其保藏号为CCTCC NO.C201158，所述培养基包含氨基酸、无机盐、维生素、激素及其他物质，其含量分别为：氨基酸749～1180mg/L，无机盐8411～10254mg/L，维生素8.4mg/L～52.5mg/L，激素1.0-5.0E-08mg/L，其他物质4302.6mg/L～9509.6mg/L。

优选地，所述氨基酸包括L–精氨酸，L–天门冬氨酸，L–半胱氨酸，L–谷氨酸，L–谷氨酰胺，L–组氨酸，L–异亮氨酸，L–亮氨酸，L–赖氨酸，L–蛋氨酸，L–苯丙氨酸，L–脯氨酸，L–丝氨酸，L–苏氨酸，L–色氨酸，L–缬氨酸，L–酪氨酸，L–丙氨酸和甘氨酸；

所述无机盐包括无水氯化钙，氯化锂，五水硫酸铜，硫酸铬，溴化钾，氟化钠，氯化铷，氯化铝·6H2O，无水磷酸氢二钠，七水硫酸亚铁，七水合硫酸锌，碳酸氢钠，氯化钾，氯化钠，，六水合氯化镁，氯化镉，醋酸钡，硝酸银，氯氧化锆·8H2O，碘化钾和氯化钴·6H2O；

所述维生素包括氯化胆碱，核黄素，叶酸，维生素K3，烟酰胺，硫辛酸，维生素B12，，维生素B6和肌醇；

所述激素为氢化可的松；

所述其他物质包括亚油酸，胸苷，腺苷，胞苷，尿苷，鸟苷，腐胺，亚硒酸钠，酵母粉，D–葡萄糖，丙酮酸钠和大豆蛋白胨。

进一步优选地，每升培养基包括下表1所示的组份：

表1本发明培养基