[发明专利]牛呼吸道疾病综合征多重PCR检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.牛呼吸道疾病综合征多重PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

MightyAmp DNA聚合酶、2xBuffe Mix缓冲液、无菌双蒸水、四对特异性引物和四个阳性对照质粒；

所述四对特异性引物分别为：鉴定牛传染性鼻气管炎病毒的引物P₁和P₂，鉴定牛呼吸道合胞体病毒的引物P₃和P₄，鉴定牛病毒性腹泻病毒的引物P₅和P₆，鉴定牛副流感3型病毒的引物P₇和P₈：

P₁：5'-GCTCGCCAACTTCTTTCAGGG-3'，

P₂：5'-GCGTCAAACTCCTCCTCTTCCTC-3'，

P₃：5'-TATGCTATGTCCCGATTGG-3'，

P₄：5'-ACTGATTTGGCTAGTACACCC-3'，

P₅：5'-GGTAGCAACAGTGGTGAGTTC-3'，

P₆：5'-CTCAGGTTAAGATGTGCTGTG-3'，

P₇：5'-GCTCTTCTCTTTTTGTCCCATTCTT-3'，

P₈：5'-AACCCCTTCCTCAATCCTGATATAC-3'；

所述四个阳性对照质粒分别为：牛传染性鼻气管炎病毒阳性对照质粒、牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒、牛病毒性腹泻病毒阳性对照质粒和牛副流感3型病毒阳性对照质粒；

所述牛传染性鼻气管炎病毒阳性对照质粒为含有306个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒，所述牛呼吸道合胞体病毒阳性对照质粒为含有600个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒，所述牛病毒性腹泻病毒阳性对照质粒为含有130个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒，所述牛副流感3型病毒阳性对照质粒为含有425个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒；

所述含有306个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒、含有600个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒、含有130个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒和含有425个碱基的核苷酸片段构成的pMD18-T重组质粒均能在大肠杆菌DH5α感受态细胞中增殖。