[发明专利]一种用于抗逆转录病毒绿茶提取物

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于抗逆转录病毒绿茶提取物的发明，属于生物药物领域。

背景技术：

肿瘤亚科的病毒和慢病毒亚科的病毒是人类及各种动物疾病的病原，始终为人们所关注及重视。艾滋病毒属慢病毒亚科的病毒，HBV病毒基因组虽为双链环形DNA，但其复制过程有RNA逆转录病毒的特性，需要逆转录酶活性产生RNA／DNA中间体，再继续进行复制。艾滋病由于抗HIV药物对器官的慢性损害的相关并发症及病毒在体内的持续存在等危害越来越严重，已使其成为一种慢性疾病。中国也是乙肝大国，目前中国大约有1.2亿人为乙肝患者或携带者，每年的医疗支出超过千亿元。而对艾滋病、乙肝病毒仍然缺少较为有效的抗病毒药物。我们的科研团队经过将近10年的努力，从茶叶中提取出了一种物质，其有别于一般的茶多酚类物质，经前期体外研究证明其可以可以结合在逆转录病毒整合酶的柔性环附近，从而影响它的加工功能和链转移功能，干扰整合酶与其辅助因子的结合，降低逆转录病毒整合入宿主基因组的几率，从而达到抑制逆转录病毒复制的作用。

发明内容：

本发明的目的是提供一种用于抗逆转录病毒绿茶提取物，经体外研究证明其可以结合在乙肝病毒及HIV病毒逆转录病毒的整合酶的柔性环附近，从而影响它的加工功能和链转移功能；另外它还可以结合在整合酶二价金属附近的氨基酸上，从而影响整合酶与二价金属的结合，降低其活力；并且干扰整合酶与其辅助因子的结合，降低逆转录病毒整合入宿主基因组的几率。通过以上方式其可以很大程度上抑制逆转录病毒的复制，从而达到清楚病毒的目的。

附图说明：

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实施方式：

1、浸提：取一定重量过20目的茶叶末，加入其重量20倍的70℃～95℃的热水，搅拌下恒温浸提60min，过滤得茶叶浸提液。取样分析浸提液中茶多酚的含量，计算浸提液中茶多酚的总量、茶多酚的浸提率。

2、盐析：加氯化钠于茶叶浸提液中，使其质量分数为6％，静置盐析1.5h后过滤。

3、沉淀：在上述滤液中加入茶叶重量2％～5％的NaHSO3，然后加入茶叶重量20％的硫酸铝饱和水溶液，加热至70℃～80℃，用15％NaHCO3溶液在快速搅拌下调节pH至5～6，此时有大量沉淀析出，沉淀自然沉降一段时间后过滤，最后用等体积70℃热水洗涤沉淀三次。

4、酸溶：将沉淀在快速搅拌下放入到茶叶重量3倍的pH=2.5~4.5的盐酸水溶液中溶解沉淀，控制酸转溶液的pH=2.5~4.5，酸溶时间50min，少量胶状沉淀经离心分离除去。取样分析计算酸转溶液中茶多酚的含量和总量，计算茶多酚经过盐析、沉淀及酸溶后的回收率。

5、萃取：加入茶叶重量3％的NaHSO3至酸转溶液中，然后用其体积0.5倍的乙酸乙酯萃取3次，每次萃取时间为10min，合并萃取液。取样分析计算萃余相中茶多酚的总量，计算茶多酚的萃取率。

6、洗涤：加入茶叶重量2％的维生素C至萃取液体积0.4倍的水中，用柠檬酸调节水溶液的pH=2.5~3.0，等分成二份对乙酸乙酯萃取液洗涤两次。

7、蒸发浓缩：将洗涤后的乙酸乙酯相在50℃～70℃下真空蒸发回收乙酸乙酯，待浓缩成膏状物时，加入膏状物2倍体积的无水乙醇洗涤挂在壁上的物料，继续浓缩成稠的膏状物。

8、干燥：将膏状物放入真空干燥箱中，在60℃～90℃下进行真空干燥，在前1～2h内，将物料搅动几次，当物料干燥成粉状或干的块状时，结束干燥。干燥时间一般4～8h。

9、纯化：将提取物使用中压硅胶填充柱，将层析硅胶用烃溶剂分散后装柱，酯溶剂溶样，烃溶剂与酯溶剂和甲酸的混合液为洗脱剂，柱塞式溶剂泵进液，洗脱后的流分分段收集，减压浓缩回收洗脱剂，浓缩物加去离子水溶解后喷雾干燥得纯度高于98％的单体提取物产品，低纯度组分作为层析原料再次纯化。回收的洗脱剂经薄层层析、p H校正后重复使用。使用后的层析柱用酯溶剂再生，烃溶剂为平衡剂平衡，平衡后的层析柱可重复使用，使用次数达30次以上。