[发明专利]蛹虫草素在猪小卵泡卵母细胞体外成熟培养中的应用有效
| 申请号： | 201310471237.3 | 申请日： | 2013-10-06 |
| 公开（公告）号： | CN103525759A | 公开（公告）日： | 2014-01-22 |
| 发明（设计）人： | 高妍;刘慧玉;张嘉保;张永宏;翟博;张连江;袁宝;权福实;刘殿峰 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N5/075 | 分类号： | C12N5/075;C12R1/91 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 魏征骥 |
| 地址： | 130012 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 虫草 卵泡 细胞 体外 成熟 培养 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.蛹虫草素在猪小卵泡卵母细胞体外成熟培养中的应用。
2.一种猪小卵泡卵母细胞体外成熟培养的方法，包括下列步骤：
（1）猪小卵泡卵母卵丘复合体的收集
卵巢采于刚屠宰母猪的卵巢，放入含75mg/ml青霉素和50mg/ml链霉素的37℃生理盐水中，并在2小时之内用生理盐水清洗2～3次；在无菌操作室内用18号针头的注射器抽取直径为<3mm卵泡的卵母卵丘复合体，在显微镜下挑取有3～5层颗粒细胞包裹，细胞质均匀，透明带完整的卵丘卵母细胞复合体；
（2）猪小卵泡卵母细胞体外成熟培养液的配制及培养
配制培养液，基础培养基为TCM-199，平衡之前加入0.1%PVA(w/v)，3.05mM D-葡萄糖,1mM丙酮酸钠，0.57mM半胱氨酸,10ng/ml EGF,10IU/ml PMSG，10IU/ml hCG，75mg/ml青霉素，50mg/ml链霉素，最后添加蛹虫草素终浓度为2μg/ml；
先用Hepes-TL-PVA洗2次之后，用平衡2h以上的培养液2次，培养条件为5%CO2，温度39℃和最大相对饱和湿度；培养44小时至MⅡ时，卵母细胞排出第一极体即为成熟；收集卵母卵丘复合体，以0.1%浓度的透明质酸酶处理2min。
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