[发明专利]细胞色素c氧化酶Ⅷ52-69及其制备方法和功能

说明书

本发明提供了一种多肽片段，经检测后发现其为细胞色素C氧化酶Ⅷ(cytochrome C oxidase subunit Ⅷ)的一个片段，由细胞色素C氧化酶Ⅷ的52‑69位的氨基酸残基组成，我们记作COX52‑69。其氨基酸序列为：LLPAGWVLSH LDSYKKRE。经实验证明该多肽片段具有抑制胰岛分泌胰岛素的作用。

技术领域

本发明涉及一种细胞色素C氧化酶Ⅷ(cytochrome C oxidase subunit Ⅷ)截短后的片段COX52-69，该多肽片段具有抑制胰岛分泌胰岛素的作用，本发明同时还提供了上述多肽片段的制备方法。

背景技术

细胞色素c氧化酶是真核生物线粒体内膜和需氧菌细胞膜电子传递链上的关键酶。它承担着细胞色素c(Cytoehroine c，cyt c)到氧分子(0：)的电子传递功能，催化氧分子还原为水分子，并与质子泵功能相偶联。所有哺乳动物真核细胞的COX由13个亚基组成，其中构成级联反应核心的最大3个亚基(COX I、II和111)由mtDNA编码。其余10个亚基(C0IV，Va,Vb，Via,Ⅵb，Ⅵc，Ⅶa.Ⅶb，Ⅶc，和Ⅷ)均由nDNA编码，即由细胞核内基因经胞浆中的核糖体翻译后经过不同途径转运至线粒体的。这10个亚基有明显的种族和器官特异性，其功能尚不明确。要形成功能复合物，需要COX 所有结构基因的表达以及超过24个COX特异基因的参与，这些特异基因可以影响COX合成的所有方面，尤其在COX全酶装配和稳定中起着重要作用。但有关在线粒体中酶是怎样装配，目前尚不清楚。所以总体来说目前还不知道细胞色素C氧化酶Ⅷ的功能。

发明内容

本发明提供了一种多肽片段，经检测后发现其为细胞色素C氧化酶Ⅷ截断后的片段，由细胞色素C氧化酶Ⅷ的52-69位的氨基酸残基组成，其氨基酸序列如下：LLPAGWVLSHLDSYKKRE。

本发明提供了上述多肽的制备方法，包括以下步骤：(1)、将猪肠道洗净后浸入沸水中浸泡3-7 分钟，浸泡完成后取出冷冻并剁碎，然后在0～10℃条件下用醋酸对肠道进行浸取后过滤得浸出液，用盐酸对浸出液中的浸出物洗脱并抽滤得耐热肠多肽；

(2)、将耐热肠多肽溶解于水中，加入抗氧化剂及足量异丙醇溶液，室温下充分静置后离心除去沉淀，然后再加入足量温度为-25℃～-15℃的异丙醇溶液并在-25℃～-15℃条件下充分静置后抽滤去除沉淀，将所得滤液的PH值调节为5.8～6.1，再在-25℃～-15℃条件下充分静置后抽滤得白色沉淀，将白色沉淀充分洗涤后即制得粗肽；

(3)、将步骤(2)中制得的粗肽溶液于醋酸溶液中制得肽溶液，将肽溶液过柱层析分离得到所要分离物，将分离物冻干得粗提取物；

(4)、将粗提取物溶解于碳酸氢铵溶液中并搅拌，离心后去除沉淀得上清液，将所得上清液过柱层析并采用PH值为8.0、浓度为0.02mol/L的碳酸氢铵溶液进行洗涤，洗涤后得到的洗涤物冻干，再将洗涤物经过两次高效液相色谱分离后，将分离物冻干即制得权利要求1所述氨基酸序列的多肽。步骤(1)中醋酸的浓度为0.5mol/L，盐酸的浓度为0.2mol/L。

步骤(2)中抗氧化剂为硫二甘醇，添加量为1.2毫升；洗涤分两次进行，第一次洗涤选用异丙醇溶液，第二次洗涤选用乙醚溶液，第二次洗涤完成后将白色沉淀放入真空环境中使乙醚在真空中蒸发。所述步骤(4)中的两次高效液相色谱分离中，第一次分离所用洗提液为0.1％的三氟乙酸水溶液与 0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液；第二次分离后所得沉淀收集并冻干。

本发明同时还提供了上述多肽的用途，用于制造抑制胰岛分泌胰岛素的药物。

本发明同时还提供了所述多肽作为药物靶向的用途，其特征在于：用于提高组织对胰岛素的敏感性，对抗组织对胰岛素的耐受。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做详细具体的说明。