[发明专利]小麦麸皮活性多糖的提取纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于小麦麸皮深加工技术领域，尤其涉及一种小麦麸皮活性多糖的提取纯化方法。

背景技术

小麦麸皮是小麦制面粉过程中提取小麦粉和胚芽后的残留部分，是小麦面粉厂的主要加工副产品，以皮层为主(包括果皮、种皮、珠心层和糊粉层)，混入少量的胚芽和未剥刮干净的胚乳，通常占小麦重量的14%～19%，它含有非淀粉多糖、淀粉、脂肪、木质素、蛋白质、维生素、酚酸类化合物等多种成分。目前小麦麸皮除少许用于麦麸面筋、麦麸膳食纤维、木糖醇和阿魏酸提取外，主要用作饲料，经济效益不高，而小麦麸皮中非淀粉多糖含量约为46%，所以很有必要对从小麦麸皮中提取纯化多糖的方法进行研究，提高其经济利用价值。

经对现有技术的文献检索发现，中国专利CN200910237352.8公开了一种具有抗肿瘤与免疫调节活性的小麦麸皮多糖及其提取方法，它是以木聚糖酶酶解小麦麸皮，得到阿拉伯木聚糖(或称戊聚糖)为主的多糖产品，但利用酶提取成本高，不适合大规模生产应用，而且多糖没有经过纯化，粗品生物活性低。

发明内容

本发明旨在于克服现有技术的不足，提供了一种利用水提醇沉法制得小麦麸皮粗多糖，之后去除杂质，利用琼脂糖凝胶柱纯化得到具有免疫调节活性的小麦麸皮活性多糖的方法，提取方法简单，运行成本低，纯化得到的多糖生物活性高。

小麦麸皮活性多糖的提取纯化方法，步骤如下：

a、预处理：将小麦麸皮去除杂质后，55～65℃烘干，研磨至30～60目；

b、脱脂：

（1）乙醇脱脂：

将经a步骤处理的小麦麸皮粉浸入为其重量5～15倍、纯度为85%的乙醇中，在60～80℃加热回流搅拌1.5～3h，冷却至室温继续搅拌10～18h，去除液体，二次加入其重量5～15倍、纯度为85%的乙醇，室温搅拌3～7h，去除液体；

（2）丙酮脱脂：

将乙醇脱脂后的小麦麸皮中加入其重量2～8倍、纯度为99%的丙酮溶液，搅拌30min后去除液体，在室温自然挥发干燥12h，得到脱脂麸皮；

c、多糖提取：

将b步骤制得的脱脂麸皮加入其重量22～30倍的水，在70℃～90℃下加热回流搅拌2～6h，取其液体，在加热至50℃蒸发，至其浓缩为原体积的1/6～1/2止，再加入乙醇至乙醇浓度不低于75%，降温至3～6℃静置10～18h，后去除液体，在室温自然挥发干燥10～18h，制得小麦麸皮粗多糖；

d、小麦麸皮粗多糖精制：

（1）去蛋白：

将c步骤所得的小麦麸皮粗糖加入其重量8～20倍的水，再加入其体积份数为1/6～1/2的Sevage试剂，搅拌20min，去除下层液体及絮状沉淀物，在上层液体中加入乙醇至乙醇溶液浓度不小于75%，降温至3～6℃静置10～18h，去除液体，再分别用其重量25～45倍的无水乙醇、25～45倍的无水丙酮和25～45倍的无水乙醚逐次洗涤，再用0.45μm的滤膜过滤，将其沉淀物在自然挥发干燥10～18h，制得小麦麸皮去蛋白多糖；

（2）去低分子量杂质：

将（1）步骤所得的小麦麸皮去蛋白多糖溶于其重量8～20倍的水中，用3500Da透析膜透析3天，取其分子量大于3500Da的透析液，冻干制得除杂质小麦麸皮粗多糖；

（3）吸附纯化：

将（2）步骤得到的除杂质小麦麸皮粗多糖加入其重量为0.01～0.06倍的水、加热至60℃溶解，注入DEAE-琼脂糖凝胶柱中色谱分离，首先用蒸馏水控制流速1.5mL/min冲洗5h，再用0.5M NaCL以同样流速继续冲洗3h、同时开始收集解析液，2h后更换1.0M NaCL作为解析剂以同样的流速洗涤1小时以上，后停止收集，所得的收集液即为小麦麸皮活性多糖溶液；

（4）去盐：

将（3）步骤所得的小麦麸皮活性多糖溶液，用3500Da透析膜透析3天，取其分子量大于3500Da的透析液，冻干制得小麦麸皮活性多糖；

其中：Sevage是由氯仿和正丁醇按4～6∶1的体积比混合制成；

进一步优化小麦麸皮活性多糖的提取纯化方法，其步骤如下：

a、预处理：将小麦麸皮去除杂质后，60℃～65℃烘干，研磨至40～50目；

b、脱脂： 

（1）乙醇脱脂：

将经a步骤处理的小麦麸皮粉浸入为其重量6～10倍、纯度为85%的乙醇中，在65℃～75℃加热回流搅拌2～2.5h，冷却至室温继续搅拌12～16h，去除液体，二次加入其重量10～13倍、纯度为85%的乙醇，室温搅拌4～6h，去除液体；