[发明专利]一种转基因玉米品系MIR162检测的引物和方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的涉及一种转基因玉米品系MIR162检测的引物和方法。

背景技术

转基因作物近年来发展迅猛，世界各国批准商业化种植的各类转基因植物产品越来越多。国际农业生物技术应用服务组织(ISAAA) 最新的研究报告称，2012年全球转基因作物种植面积达到1.703亿公顷，较2011年增长了6%，较1996年（170万公顷）增长了100倍。其中，转基因玉米是仅次于转基因大豆的世界第二大转基因作物。在所有商品化的转基因作物中，转基因玉米品系最多，共有65个转化事件。

但是由于转基因技术可能产生新毒素和过敏原、导致抗性基因的基因漂移等原因，国际社会对转基因食品的安全性仍有相当大的争议。包括我国在内的世界许多国家都出台了转基因产品管理法规，要求对转基因产品进行检测、标识和管理。

自2009年以来，我国进口玉米大幅增长，2012年全年玉米进口520.74万吨，同比增长197%，主要进口来源地为美国。然而，我国许可进口的转基因玉米品系只有13个。根据我国法律法规，必须对入境玉米进行转基因检测以排除未批准品系进境。

MIR162是由先正达公司开发的抗鳞翅目昆虫的转基因玉米，已通过了美国、加拿大、阿根廷、巴西、日本和俄罗斯等国的种植许可，但中国农业部并未批准该转基因玉米品系进口。为防止非法转基因生物及其产品在国内种植和销售，对这种转基因玉米品系的检测十分重要。

转基因成分的检测主要采用TaqMan实时荧光 PCR方法和普通 PCR方法。TaqMan实时荧光 PCR检测方法灵敏度高，特异性好，但需要荧光PCR仪，设备和试剂成本昂贵。普通 PCR方法也具有较高的灵敏度，然而成本较低、操作简便，是目前国际上最常用的作物转基因成分检测方法，更能满足基层一线实验室的普遍要求。

根据PCR的扩增目的片段，转基因成分的检测方法又分为外源基因特异性检测方法、结构特异性检测方法和品系特异性检测方法。

目前，国外转基因玉米品系MIR162检测标准方法是欧盟官方方法“Quantitative PCR method for detection of maize event MIR162 (Charles Delobel et al., 2011) ”，国内转基因玉米品系MIR162检测标准方法是SN/T 1196-2012。这2个标准均采用实时荧光 PCR方法，前者为品系特异性检测方法，后者为结构特异性检测方法。

其他研究包括：（1）邓婷婷等2012年发表了“转基因玉米MIR162品系的实时PCR及可视芯片检测方法研究”（植物检疫, 2012, 26(5), 14-18），采用荧光PCR方法。（2）Jae-Hwan Kim等2009年发表了利用多重PCR检测四个转基因玉米品系（3272、LY038、MIR162和MON88017）的方法（J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem. 2009, 52(1), 105-107）。该方法经证实在14个转基因品系中不能特异性检测出MIR162品系（见图1）。（3）路兴波等申请了专利“用于检测转基因玉米MIR162的特异性引物、探针及其应用”（CN201210053592）和“用于检测转基因玉米MIR162的特异性引物及荧光标记探针及其应用”（CN201210052534）。这两个专利申请公开了检测MIR162的普通PCR方法和荧光PCR方法。但两个专利中普通PCR引物对的扩增产物分别只有94bp和98bp，过小的靶序列较易导致假阳性结果发生。此外，其中的专利申请CN201210053592检测方法中的引物序列在Genbank中的Blast结果表明，其目的片段并非玉米植物基因组和外源DNA片段的边界序列，因此该方法不是MIR162品系特异性检测方法。专利申请CN201210052534检测方法的PCR扩增目的基因为Vip3Aa20，该基因是来自苏云金芽孢杆菌的抗鳞翅类昆虫的特异性抗虫基因，因此该检测方法为外源基因特异性检测方法。虽然目前只有MIR162转入了Vip3Aa基因，但如果有其他植物品系也转入了该外源基因，则用该方法也能得到阳性结果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性好、检测方法快速简便、准确性高、灵敏度高，适用基层一线实验室应用的转基因玉米MIR162品系特异性检测方法。