[发明专利]一种用于生物标记物筛选的抗体芯片试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其涉及一种用于生物标记物筛选的抗体芯片试剂盒。

背景技术

细胞因子（cytokines）是机体的免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽。

细胞因子具有非常广泛的生物学活性，能够促进靶细胞的增殖和分化，促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达，增强抗感染和细胞杀伤效应，促进炎症过程，影响细胞代谢等。细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等。众多细胞因子在体内通过旁分泌、自分泌或内分泌等方式发挥作用，具有多效性、重叠性、拮抗性、协同性等多种生理特性，形成了十分复杂的细胞因子调节网络，参与人体多种重要的生理功能。

细胞因子是通过与靶细胞表面的细胞因子受体特异结合后发挥其生物学效应的，促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和杀肿瘤细胞效应，促进或抑制其他细胞因子的合成，促进炎症过程，影响细胞代谢等。每种细胞因子可作用于多种细胞，可受多种细胞因子的调节，具有网络性的特点；不同细胞因子之间具有相互协同或相互制约的作用，由此构成了复杂的细胞因子免疫调节网络。

因此，细胞因子研究及检测具有非常重要的理论和实用意义，利用细胞因子抗体芯片检测病人标本，可筛选出此疾病的生物标记物，有助于阐明分子水平的免疫调节机理，有助于疾病的预防、诊断和治疗。

目前常用的细胞因子的检测方法主要包括：酶联免疫吸附法（ELISA），放射免疫分析（radio immunoassay，RIA），免疫印绩法（western blot），流式细胞仪（Flow-Cytometry），液相磁珠法（LUMINEX）和96-孔ELISA板法等。其中，酶联免疫吸附法是最普遍的方法，具灵敏度高、特异性较好、操作简便等优点。但一次试验只能检测单一指标，通量低、成本高，在具有多指标特性的细胞因子检测中，该方法存在明显的不足；放射免疫分析（RIA）虽然灵敏度高，是由于具有放射性污染，现在已很少采用；免疫印迹法能测定分子的大小，且无非特异的反应，但操作繁琐，灵敏度低，且只能检测单一指标，不适合运用于细胞因子的检测；流式细胞仪能在细胞水平上检测细胞因子的水平，但却存在低灵敏、低通量、高成本等缺点，且采用的设备结构复杂，不易推广。液相磁珠法(LUMINEX)容易出现交叉干扰，以至于同时检测因子的数目有限。96孔ELISA板法是把不同的捕获抗体以微阵列的方式固定在96孔酶标板底，然后通过类似ELISA的操作来达到多因子的联合检测。但由于96孔酶标板受孔径大小限制，在一个孔内点的数目有限，重复性也差。

因此，有必要开发一种新型的多细胞因子联合检测试剂盒，以克服现有技术中亟待解决的问题，实现多细胞因子的高通量、高灵敏度、高特异性和低成本检测，实现疾病的生物标记物的高通量筛选。在本发明中，我们选用没有空间限制的底膜作为载体，将60种细胞因子的捕获抗体点不受空间的限制，具有独立位点地点在底膜上，减少捕获抗体彼此干扰的因素，使得细胞因子高通量筛选成为可能，所检测的细胞因子灵敏度可达单因子的ELISA检测灵敏度。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题在于提供一种高通量、高灵敏度、高特异性和低成本的细胞因子检测试剂盒，采用蛋白质芯片技术，能够同时检测六十项细胞因子，克服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、需有费仪器、灵敏度低等缺陷，具有廉价、便利、灵敏、准确、高通量、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。

为了解决上述技术问题，本发明提供的一种检测多种细胞因子用于筛选生物标记物的抗体芯片试剂盒，包括：抗体芯片，包括底膜和在底膜表面上固定的60种细胞因子的特异性抗体、三种阳性对照；生物素标记的细胞因子检测抗体混合物；和辣根过氧化物酶标记的抗生物素蛋白链菌素。

根据本发明所述的试剂盒的进一步特征，所述底膜为硝酸纤维素膜、聚偏氟乙烯膜或者尼龙膜，采用全自动点样仪完成点样操作，各特异性抗体点阵排布于所述底膜。