[发明专利]鉴定高丹草种子真伪的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明主要涉及鉴定高丹草种子真伪的方法及其专用引物。具体涉及高丹草和高梁基因检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

随着畜牧业的发展，牧草的需求量越来越大，安全要求也越来越高。高丹草作为优良饲用作物新品种被科研工作者广泛关注。我国高丹草播种面积已达6.7万亩，（于卓，2006），有效补充了牧草饲料不足。高丹草种子需求量逐年升高，而我国高丹草的种子产量较低，主要集中于内蒙和东北。高质量的种子是安全优质牧草的保障，因而准确迅速鉴定出高丹草种子中高梁种子的含量，对于提高我国高丹草种子的质量具有十分重要的意义。

高丹草（Sorghum hybrid sudangrass）具有优质、高产、饲用价值高（粗蛋白含量15%）、适口性好、用途广泛等特点。高梁（Sorgum bicolor），其营养价值不仅低于高丹草（粗蛋白含量11%）。而且含有氢氰酸，适口性较差。而这两种牧草的种子、幼苗和叶片在外观形态上极其相似（图1），千粒重差异不显著（图6），分辨十分困难，一旦两种牧草种子混杂，将对高丹草的种植和利用产生不可挽回的损失，而现在国内外还没有一个统一的、行之有效的鉴定方法。只能依靠肉眼观察或称千粒重，所以结果并不准确。

发明内容

本发明的目的是避免现有检测技术的不足，提出一种鉴定高丹草种子真伪的引物。

本发明的又一目的是提供一种鉴定高丹草种子真伪的试剂盒。

本发明的目的三是提供一种鉴定高丹草种子真伪的方法。

以便快速、高效和准确的鉴定高丹草种子的真伪。此方法省时省力，操作简便，在实验室条件下较短时间内能够很好的完成。本研究具有很强的推广价值，有助于种子检验人员对高丹草种子和高梁种子的区分，使高丹草更好的为畜牧业生产服务，为保障我国的粮食安全打下坚实的基础。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种鉴定高丹草种子真伪的引物，其主要特点是包括有：

第一对高丹草引物：GL-R3-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，

                 GL-R3-R（5′-3′）：TAACTGCTACACAATGGCCCTTT；

第二对高梁引物：GLC-R1-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，

                 GLC-R1-R（5′-3′）：TGAACTTCAAGATGCCGACTCC。

一种鉴定高丹草种子真伪的试剂盒，其主要特点是包括有：

第一组：高丹草PCR检测体系，其中包括TaKaRa Taq0.25μl，10×PCRBuffer（Mg²⁺Plus），dNTP Mixture，引物GL-R3-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，引物GL-R3-R（5′-3′）：TAACTGCTACACAATGGCCCTTT，ddH₂O；

第二组：高梁PCR检测体系，其中包括TaKaRa Taq，10×PCR Buffer（Mg²⁺Plus），dNTP Mixture，引物GLC-R1-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，引物GLC-R1-R（5′-3′）：TGAACTTCAAGATGCCGACTCC，ddH₂O。

一种鉴定高丹草种子真伪的方法，其主要特点包括如下步骤：

A.收集种子，采用双层滤纸萌发法，25℃萌发72小时，提取萌发种子基因组DNA备用；

B.利用第一对高丹草专用引物，对种子基因组DNA进行PCR检测；PCR检测体系总体积为50μl，其中包括TaKaRa Taq0.25μl，10×PCR Buffer，Mg²⁺Plus，5μl，dNTP Mixture4μl，DNA模板，浓度为5000ng/μl，1μl，引物GL-R3-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，浓度为10nM，1μl，引物GL-R3-R（5′-3′）：TAACTGCTACACAATGGCCCTTT，浓度为10nM，1μl，ddH₂O37.75μl；扩增条件为：（1）95℃预变性3分钟；（2）95℃变性35秒；（3）56℃退火35秒；（4）72℃延伸35秒；（5）2～4步骤循环35次；（6）72℃延伸7分钟；