[发明专利]甜菊苷及莱鲍迪苷A的提纯制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物医药技术领域的方法，具体是一种同时制备高纯度甜菊苷及莱鲍迪苷A的方法。

背景技术

甜菊苷及莱鲍迪苷A为二萜苷类化合物，是菊科植物甜叶菊Stevia rebaudiana干燥叶中的主要活性成分。其结构式如下：

甜叶菊原产于南美洲，1977年我国引进栽培获得成功。甜叶菊具有低热量、高甜度、无副作用等优点，是一种低热值的天然糖料植物，可代替蔗糖和合成甜味剂，其甜度相当于蔗糖的250-300倍，但其所含热量仅为蔗糖的1/300。甜叶菊具有较好的抗菌、抗氧化活性；可有效预防和治疗糖尿病；软化血管和降低血脂，对肥胖症、动脉硬化、冠心病有较好的防治效果。高纯度的甜菊苷及莱鲍迪苷A可作为化学对照品用于甜叶菊药材、含甜叶菊制剂的定性鉴别及定量分析，因此，如何从甜叶菊中同时制备高纯度的甜叶菊及莱鲍迪苷A具有重要意义。

名为“甜菊糖苷中莱鲍迪A苷的研究”的学位论文中（刘杰，江南大学）公开了一种利用高效液相制备色谱制备相对纯度为99%的莱鲍迪苷A的方法，即在制备条件（采用Lichrospher NH₂10×250mm制备柱，以乙腈-水（35:65，v/v）为流动相，4mL/min流速，进样量200μL）得到莱鲍迪苷A。这种方法只制备得到了莱鲍迪苷A，未能同时制备甜菊苷；同时，利用制备高效液相色谱的方法不能得到广泛的运用。

经过对现有技术的检索发现，中国专利文献号CN101220062，公开日2008-07-16，公开了一种高纯度甜菊苷和莱鲍迪苷A的制备方法。该方法以甜叶菊(StiviarebaudianaBertoni)的干燥叶或植株中的任一部位，或新鲜采集的同属其它植物的叶或其它部位为原料，采用溶剂提取法、大孔树脂吸附法、聚酰胺层析法、硅胶柱层析法、反相柱层析法或Sephadex LH-20柱层析法、Toypear1柱层析法的一种或者多种方式分离，采用结晶、重结晶、柱层析等方法进行纯化，并结合干燥等方法制备高纯度甜菊苷和莱鲍迪苷A，纯度均在85％以上。但该技术制备得到的甜菊苷及莱鲍迪苷A纯度较低，不能满足生物医药技术领域应用中对纯度的要求。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种甜菊苷及莱鲍迪苷A的提纯制备方法，制备得到的甜菊苷及莱鲍迪苷A纯度均达到98%以上，可作为化学对照品用于甜叶菊药材、含甜叶菊制剂的定性鉴别及定量分析；还可作为单体成分，对其活性进行研究。

本发明是通过以下技术方案实现：本发明通过将甜叶菊醇提液采用大孔树脂吸附并经过洗脱得到甜叶菊提取物浸膏，再将提取物浸膏进行硅胶柱层析并洗脱后收集其中流份，最后将收集的流份进行重结晶，得到纯度98%以上的甜菊苷及莱鲍迪苷A精制品，其具体步骤如下：

1）先将甜叶菊药材粉碎，加入乙醇溶液回流提取，过滤，取滤液依次用氯仿、正丁醇萃取，得正丁醇层浸膏；

2）将正丁醇层浸膏过大孔树脂吸附并辅以乙醇进行除杂洗脱，回收溶剂，收集其中流份，得浸膏；

3）将浸膏进行柱层析并辅以氯仿-甲醇溶液洗脱，回收溶剂并收集其中流份，得到甜菊苷及莱鲍迪苷A粗品；

4）将甜菊苷及莱鲍迪苷A 粗品利用甲醇进行重结晶，得到纯度大于98%的甜菊苷及莱鲍迪苷A精制品。

所述的甜叶菊为菊科植物甜叶菊干燥叶；

所述的回流提取过程中采用浓度为50%-70%（v/v）的乙醇溶液作为提取溶剂，其用量为8-12倍（W/V），提取1-2次。

所述的大孔树脂吸附采用HZ-801的大孔树脂；

所述的除杂洗脱是指：以浓度为40%(V/V)的乙醇溶液进行除杂，以浓度为50%-70%（V/V）的乙醇溶液进行洗脱。

所述的氯仿-甲醇溶液中氯仿与甲醇的体积比为9:1～6:4；

所述的收集其中流份是指：采用TLC检测，以氯仿：甲醇：水5:4:1的体积比配制展开剂，以50%（v/v）硫酸-乙醇配置显色剂，通过加热显色进行检测，分别合并含甜菊苷及莱鲍迪苷A的流份。

技术效果