[发明专利]基于三维荧光检测黄曲霉素B1的方法

说明书

技术领域

基于三维荧光检测黄曲霉素B₁的方法属于环境检测的技术领域。 

背景技术

黄曲霉素是一种毒性极强的剧毒物质，1993年被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为1类致癌物。除致癌性外，黄曲霉素还对人及动物内脏组织有破坏作用，其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药。其中，黄曲霉素B₁存在于天然污染的食品中，如：玉米、花生、棉花种子以及干果，更容易被误食。当摄入微量黄曲霉素B₁，就可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生；随着摄入量的增大时，可引发急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生的病变。由于黄曲霉素的毒性和致癌性，检测农产品中黄曲霉素的含量尤为重要。 

目前，传统的黄曲霉素检测方法主要有薄层层析（TLC）、液相色谱法（HPLC）、酶联免疫法（ELISA）等方法，其中薄层层析（TLC）和液相色谱（HPLC）方法在提取之后需要进一步的清除步骤和衍生化以去除干扰物质，操作繁琐且耗时较长；酶联免疫法（ELISA）方法检测相对较快，但重现性差，易受样品基质干扰假阳性率高，难于定量。最近出现了一种利用三维荧光光谱检测黄曲霉素的方法，该方法检测速度快、操作简便。2012年杜树新等人发表在发光学报上的“三维荧光光谱的特征区域选择方法”，将数学中的二元凸函数判定和数据挖掘中的聚类分析方法结合，提出了针对三维荧光的光谱区域选择方法。该方法重现性好、可实现定量分析；遗憾的是，该方法仅可从光谱图中提取出含有有用光谱信息的凸集区域，但并没有解决三维荧光光谱中背景光谱和背景漂移等问题，因此并没有提高从原始荧光谱图中获取的浓度荧光峰强度的准确性，即并没有提高利用荧光峰强度判断黄曲霉素B₁含量的准确性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种基于三维荧光检测黄曲霉素B₁的方法，该方法操作简便、检测速度快、定量效果好且结果准确性高。 

 发明的目的是这样实现的： 

基于三维荧光检测黄曲霉素B₁的方法，包括：

a、基于平行因子分析法（PARAFAC），根据标准样品建立定量分析模型，具体为：

 步骤a1、制备标准样品；

步骤a2、对标准样品进行预处理；

步骤a3、采用标准方法对标准样本进行定量分析；

步骤a4、采用荧光分光光度计对标准样品进行测量，确定标准样品EEM谱图的特征区域；

步骤a5、基于PARAFAC建立标准样品的定量分析模型；

b、对待测样本进行定量检测，具体为：

步骤b1、对待测样品进行预处理；

步骤b2、根据确定标准样品EEM谱图的特征区域选择待测样品EEM谱图的特征区域；

步骤b3、采用荧光分光光度计对标准样品进行测量；

步骤b4、根据基于PARAFAC建立标准样品的定量分析模型对测量值进行计算，得到测量结果。

上述的基于三维荧光检测黄曲霉素B₁的方法，所述的步骤a1，具体为：准确称取2.5mg黄曲霉素B₁标准品，先用5mL乙腈溶解，再用苯稀释至250mL，得到浓度10μ/mL的黄曲霉素B₁标准使用液。

上述的基于三维荧光检测黄曲霉素B₁的方法，所述的步骤a2，具体为：用苯-乙腈混合液将黄曲霉素B₁标准使用液分别稀释2倍、5倍、10倍、25倍、50倍、100倍和250倍，得到浓度分别为5.0μ/mL、2.0μ/mL、1.0μ/mL、0.4μ/mL、0.2μ/mL、0.1μ/mL和0.04μ/mL黄曲霉素B₁标准溶液。

 上述的基于三维荧光检测黄曲霉素B₁的方法，所述的步骤a5，具体包括以下步骤：

步骤a51、建立一个三线性模型，具体为：

式中，X为三维数据库，表示第i个样本在发射波长j和激发波长k处的荧光强度；

 A为发射光谱矩阵，与第i个样本中第f个分析物的浓度成正比；

B为激发光谱矩阵，与第f个分析物在发射波长j处的荧光量子效率线性相关；