[发明专利]污水处理厂亚硝酸盐氧化菌荧光定量PCR检测方法

权利要求书

1.一种污水处理厂亚硝酸盐氧化菌实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于：污水生物处理系统中的亚硝酸盐氧化菌包括硝化菌属和硝化螺菌属，分别定量检测这两个属的微生物数量，二者数量之和是亚硝酸盐氧化菌的总量；提取实际生活污水处理系统中活性污泥微生物的基因组DNA；采用硝化菌属和硝化螺菌属16S rDNA引物进行常规PCR扩增；将两个属的纯化回收的DNA扩增片段与载体连接，连接好的载体导入感受态细胞培养15-18h，挑取白斑进行重组菌落PCR验证；提取包含目的片段的质粒用作实时荧光定量PCR的标准品，在实时荧光定量PCR仪上进行扩增，建立标准曲线；利用建立的标准曲线对污水处理厂中亚硝酸盐氧化菌进行定量检测；

上述常规PCR扩增体系如下：

上述实时荧光定量PCR扩增反应体系如下：

当检测硝化菌属时采用硝化菌属的正向引物为TGCGACCGGTCATGG，反向引物为GGGCGGWGTGTACAAGGC；当检测硝化螺菌属时采用硝化螺菌属的正向引物为CCTGCTTTCAGTTGCTACCG，反向引物为GTTTGCAGCGCTTTGTACCG；

上述硝化菌属常规PCR和实时荧光定量PCR扩增程序如下：95℃处理10min；35个循环反应，每个循环包括95℃1min，62℃1min，72℃2min；硝化螺菌属常规PCR和实时荧光定量PCR扩增程序如下：95℃处理10min；35个循环反应，每个循环包括95℃1min，60℃1min，72℃2min。