[发明专利]一种检测耐喹诺酮类抗生素空肠弯曲杆菌的多重PCR方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速检测耐喹诺酮类抗生素空肠弯曲杆菌的分子生物学技术。

背景技术

空肠弯曲杆菌是一种主要的食源性感染病原菌，在许多经济发达国家由空肠弯曲杆菌感染引起的腹泻在细菌性腹泻病中位居榜首。在发展中国家，空肠弯曲杆菌引起的腹泻仅次于大肠杆菌和志贺氏菌。近年来，随着空肠弯曲杆菌耐药性的增强，使其在食物中污染程度增高，由其造成的食物中毒事件迅速增加。世界卫生组织(WTO)已将该病列为最常见的传染病之一，我国的国家食源性疾病监测网于2003年增加了对弯曲菌病的监测。在自然界中，空肠弯曲杆菌广泛存在于鸡，鸭，牛，羊等家禽，家畜以及鸟类的肠道内，构成空肠弯曲杆菌的体外储存宿主。空肠弯曲杆菌污染的肉，奶，蛋以及水源等是空肠弯曲杆菌感染的主要传染源。无论在动物体内还是在人类感染中，目前空肠弯曲杆菌的耐药问题世界性普遍存在，成为空肠弯曲杆菌病预防控制及临床治疗所面临的重要挑战。

喹诺酮类药物是治疗空肠弯曲杆菌肠炎中使用最普遍的药，不幸的是90年代后随着其大量的应用，其耐药性迅速增加，耐药菌株也开始传播。不仅人类感染菌株中其耐药比例逐渐增加，在动物中，家畜，家禽及肉类食品分离菌株中，喹诺酮的耐药也逐渐增加。随着喹诺酮类抗性菌种造成感染数量的增多,人类感染空肠弯曲杆菌病例也越来越多。人们在肉用动物生产中使用了大量的喹诺酮类药物,使喹诺酮类药物在食物链中出现造成空肠弯曲杆菌对其产生耐药性。

目前细菌耐药性检测主要是通过基于培养的药物敏感性实验，包括纸片扩散法、最小抑菌浓度(MIC)法等。其中MIC法属于金标准，可以表明细菌对药物的敏感性，从而指导临床治疗。由于上述药物敏感性实验是基于培养的，因此耗时较长，约2-3天才能获得结果，而且灵敏度较差，因此，临床亟需快速灵敏的实验方法来检测细菌耐药性，指导临床治疗方案，控制耐药细菌的传播和扩散。

发明内容

本发明的目的是为了克服传统检测方法的缺陷，提供一种简便、快捷、准确率高的检测耐喹诺酮类抗生素的空肠弯曲杆菌的引物组合物及方法，所述方法具体涉及一种整合菌种鉴定多重PCR技术和MAMA-PCR技术的分子生物学方法。

本发明提供的一种用于辅助鉴别待测空肠弯曲杆菌是否耐喹诺酮类抗生素的引物对，由如下1）和2）所述引物组成：

1）具有序列表中SEQ ID №：5所示的核苷酸序列；

2）具有序列表中SEQ ID №：7所示的核苷酸序列。

本发明提供的另一种用于辅助鉴别待测空肠弯曲杆菌是否耐喹诺酮类抗生素的引物组合物，由如下所述引物组成：具有序列表中SEQ ID №：1、所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的引物和具有序列表中SEQ ID №：7所示核苷酸序列的引物。

本发明提供的再一种用于辅助鉴别待测空肠弯曲杆菌是否耐喹诺酮类抗生素的引物组合物，由检测组引物组合物和质控组引物组合物组成；

所述检测组引物组合物由如下所述引物组成：具有序列表中SEQ ID №：1、所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的引物和具有序列表中SEQ ID №：7所示核苷酸序列的引物；

所述质控组引物组合物由如下引物组成：具有序列表中SEQ ID №：1、所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：4所示核苷酸序列的引物、具有序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的引物和具有序列表中SEQ ID №：6所示核苷酸序列的引物。

本发明的另一个目的是提供一种用于辅助鉴别待测空肠弯曲杆菌是否耐喹诺酮类抗生素的试剂盒，所述试剂盒包括上述任一所述的引物对或引物组合物。