[发明专利]一种用于检测猪流感病毒的试剂盒及其应用

权利要求书

1. 一种用于检测猪流感病毒的LAMP特异性引物组，其特征在于：

SIV-F3 GTCTCAAGGCACCAAACG       SEQ ID NO：1 

SIV-B3 AAAAGCAGAGAGCACCAT       SEQ ID NO：2 

SIV-FIP ACAGATGCTCTGATTTCTGTGGCTTTTTATCGTATGAACAAATGGAGACT

SEQ ID NO：3 

SIV-BIP GGTGGAATCGGAAGATTCTACATCTTTTTGCTATTTTGAATTAATCGTCCCT

SEQ ID NO：4。

2.一种用于检测猪流感病毒的试剂盒，它是由下述成分组成：

（1）LAMP反应液：

每22μL LAMP反应液中含有：2×Buffer（含Mg²⁺） 2.5μL；SIV-F3  0.5μL； SIV-B3  0.5μL；SIV-FIP 4μL；SIV-BIP 4μL；dNTPs 3.5μL；水7μL

（2）8U/μL  Bst酶

（3）用于检测猪流感病毒的LAMP特异性引物；其中的引物指的是：

SIV-F3   GTCTCAAGGCACCAAACG        SEQ ID NO：1 

SIV-B3   AAAAGCAGAGAGCACCAT       SEQ ID NO：2 

SIV-FIP  ACAGATGCTCTGATTTCTGTGGCTTTTTATCGTATGAACAAATGGAGACT

SEQ ID NO：3 

SIV-BIP  GGTGGAATCGGAAGATTCTACATCTTTTTGCTATTTTGAATTAATCGTCCCT

SEQ ID NO：4。

3.一种用于检测猪流感病毒H1N1、H3N2、H1N2亚型的LAMP方法，其特征在于：按如下的步骤进行：

（1）扩增反应体系：在LAMP反应体系中加入样品cDNA模板2μL，Bst酶1μL

（2） 扩增反应过程：在DNA循环仪上95 ℃条件下变性5min，在63 ℃进行60min，并且在80℃持续2min，4℃，保存；

（3）扩增反应结束，取扩增产物5μL~7μL，进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳结果确定检测样品是否含有猪流感病毒；

（4）反应会产生各种片断长度的茎环结构的扩增产物，因此在电泳图谱中显示为从点样孔处开始的弥散和条带现象，如果电泳后出现特征性“梯状”条带，则说明样品中还有猪流感病毒。

4.权利要求1所述用于检测猪流感病毒的LAMP特异性引物组在制备用于检测H1N1、H3N2、H1N2亚型猪流感病毒的试剂盒中的应用。