[发明专利]一种天然免疫佐剂及其疫苗组合物和制备方法

说明书

本发明公开了一种天然免疫佐剂及其疫苗组合物和制备方法。所述天然免疫佐剂是至少包含皂甙和蜂胶两种组分的复方佐剂，将皂甙溶于水配制皂甙溶液，将蜂胶溶于95%的乙醇配制蜂胶乙醇溶液，然后将皂甙溶液与抗原按比例混匀，再加入蜂胶乙醇溶液或用水稀释后的蜂胶溶液，得到所述疫苗组合物。本发明首次将皂甙和蜂胶按一定比例配伍，并采用独特工艺制备成天然复方佐剂，与单一成分天然佐剂相比极大地提高了免疫反应水平，增强了免疫效果。

技术领域

本发明涉及动物疫苗领域，特别涉及动物疫苗佐剂。

背景技术

“Adjuvant”，即佐剂，最早来源于希腊语“adjuvare”，也就是帮助的意思。免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用，能增强机体针对抗原的免疫应答能力，或改变免疫反应类型的物质。常用的免疫佐剂很多，有油乳化剂、金属化合物、天然或人工合成的细菌产物、核酸序列、脂质体和免疫刺激复合物等，但均存在不同缺陷（如免疫效果不理想或毒副作用大等），限制了其应用和发展。

目前国内所使用的畜禽疫苗仍以传统油佐剂疫苗为主，存在着免疫效果差、生产工艺复杂、副作用强等一系列严重问题。而天然提取物佐剂以可选择面广，成本低廉，具水溶性，毒性作用小，绿色天然等优点日益受到重视，这类新佐剂疫苗势必将取代传统的油佐剂疫苗。新佐剂疫苗的安全性高，生产设备投资少，生产工艺简单，估计每头份成本不高于现有油佐剂灭活疫苗，如能推广，必将产生巨大的社会、经济效益。

对于天然提取物佐剂，目前研究较为广泛的物质包括蜂胶、皂甙和各种脂质多糖等等。

皂甙（皂苷/皂草苷/皂角苷/皂素/皂苷元/肥皂草素/地奥皂甙），是从各种天然植物中筛选到具有佐剂活性的成分。大量研究表明：皂甙为目前唯一能使外源性抗原既刺激机体Th1免疫应答，又能诱导CTL应答的佐剂。这一独特的性质使其成为亚单位疫苗、细胞内病原体疫苗及癌症疫苗的理想佐剂。目前应用范围主要包括口蹄疫疫苗、狂犬疫苗等兽用疫苗。

蜂胶具有广谱的生物学活性，是一种天然的免疫增强剂。应用蜂胶或配合抗原引入机体，既能引起特异性免疫应答，又能启动非特异性防御机制，增加抗体产量，增强补体活性和吞噬细胞的吞噬能力。用蜂胶制成的禽霍乱菌苗具有安全可靠和无毒副作用等优点。蜂胶所含的成分极其复杂，其本身是否有抗原性值得注意。波兰的一些学者研究表明，蜂胶本身无明显抗原性和过敏性，毒性作用较小。

但这些佐剂成分在现有制备技术下作为抗单独使用存在着诱导免疫反应产生水平低，免疫保护效果差等一系列问题。

发明内容

针对目前天然佐剂的不足，本发明的目的在于提供一种天然提取物的复方佐剂，以及利用该天然复方佐剂制备的疫苗组合物，以提高疫苗的免疫反应水平和免疫保护效果。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种天然免疫佐剂，包含皂甙和蜂胶。

本发明的天然免疫佐剂是至少包含皂甙和蜂胶两种组分的复方佐剂，先分别配制皂甙溶液和蜂胶溶液，然后在配制疫苗时将它们与抗原按一定比例混匀，疫苗中皂甙和蜂胶的质量比为1∶0.8～1∶2。

上述皂甙溶液是将皂甙溶于水并除菌制得；而蜂胶溶液是先将蜂胶溶于95%的乙醇配制蜂胶乙醇溶液，该蜂胶乙醇溶液可直接应用于疫苗配制，也可以进一步用水稀释后再应用于疫苗配制。

通常，上述蜂胶乙醇溶液中蜂胶的浓度在100-350mg/ml。

基于上述天然免疫佐剂，本发明提供一种疫苗组合物，包括免疫佐剂和抗原，其中免疫佐剂至少包含皂甙和蜂胶两种天然物质。

上述疫苗组合物中，皂甙的含量为4mg/ml～30mg/ml；蜂胶的含量为5mg/ml～30mg/ml。

本发明的疫苗组合物通过下述方法制备得到：