[发明专利]一种适用于阪崎肠杆菌实时荧光定量PCR检测的质粒标准分子

权利要求书

1.一种阪崎肠杆菌的质粒标准分子，其特征在于，该质粒标准分子包含阪崎肠杆菌的大分子合成操纵子基因序列，所述大分子合成操纵子基因序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

2.一种阪崎肠杆菌的质粒标准分子，其特征在于，该质粒标准分子的序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

3.一种如权利要求1或2所述阪崎肠杆菌的质粒标准分子的定量方法，其特征在于，其包括以下步骤：

①提取质粒标准分子；

②根据步骤①所得的质粒标准分子的碱基组成和序列长度，计算质粒标准分子中的磷元素的含量；

③配制梯度浓度的磷标准溶液，并用此标准溶液作出高分辨电感耦合等离子体发射质谱的标准曲线；

④高分辨电感耦合等离子体发射质谱检测质粒标准分子溶液，并根据步骤③所得的标准曲线得出质粒标准分子溶液的磷含量；

⑤根据步骤④所得的质粒标准分子溶液的磷含量和步骤②所得的质粒标准分子中的磷元素的含量，计算出质粒标准分子的浓度。

4.如权利要求3所述阪崎肠杆菌的质粒标准分子的定量方法，其特征在于，步骤③所述高分辨电感耦合等离子体发射质谱检测的条件为：冷却气流量为10L/min～25L/min，辅助气流量为0.5L/min～3.0L/min，雾化气流量为0.5L/min～1.5L/min，功率为1200W～1400W。

5.如权利要求3所述阪崎肠杆菌的质粒标准分子的定量方法，其特征在于，步骤③所述高分辨电感耦合等离子体发射质谱检测的条件为：冷却气流量为16.86L/min，辅助气流量为0.88L/min，雾化气流量为1.123L/min，功率为1350W。

6.一种阪崎肠杆菌实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所采用的标准物质是如权利要求1或2所述的质粒标准分子。

7.如权利要求1或2所述的质粒标准分子在阪崎肠杆菌实时荧光定量PCR检测中的应用。

8.一种如权利要求1或2所述的阪崎肠杆菌的质粒标准分子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

①人工合成阪崎肠杆菌的大分子合成操纵子基因序列，所述大分子合成操纵子基因序列如序列表中SEQ ID NO：1所示；

②将步骤①所得阪崎肠杆菌的大分子合成操纵子基因序列克隆至克隆载体上，得到阪崎肠杆菌的质粒标准分子。

9.如权利要求8所述的阪崎肠杆菌的质粒标准分子的制备方法，其特征在于，步骤②所述克隆载体为pUC19，pUC18，pUC118，pUC119，pBlueScript II SK或pGEM。

10.如权利要求8所述的阪崎肠杆菌的质粒标准分子的制备方法，其特征在于，步骤②所述克隆载体为pUC19。