[发明专利]适合除草剂筛选标记Bar基因的RNA干扰载体

权利要求书

1.一种适合除草剂筛选标记Bar基因的载体，其特征在于，所述载体包含干扰载体、DNA片段2以及DNA片段3，所述干扰载体包含水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子、位于所述水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子两侧的上游的多克隆位点和下游的多克隆位点，所述内含子为序列表序列1中第9621-10099位核苷酸，上游的多克隆位点为BamHI、SmaI、XmaI、MluI，下游的多克隆位点为HpaI、SpeI和SacI；所述适合除草剂筛选标记Bar基因的载体按照如下I或Ⅱ方法制备：

I包括以下步骤：

1）将DNA片段2插入所述的干扰载体的上游多克隆位点，得到含有下游多克隆位点的中间载体A；

2）将DNA片段3插入步骤1）得到的中间载体A的下游多克隆位点，得到适合除草剂筛选标记Bar基因的载体；

Ⅱ包括以下步骤：

A、将DNA片段3插入所述的干扰载体的下游多克隆位点，得到含有上游多克隆位点的中间载体B；

B、将DNA片段2插入步骤A得到的中间载体B的上游多克隆位点，得到适合除草剂筛选标记Bar基因的载体；

所述的DNA片段2的核苷酸序列为序列表中序列4；

所述的DNA片段3的核苷酸序列为序列表中序列5。

2.根据权利要求1所述的适合除草剂筛选标记Bar基因的载体，其特征在于所述的适合除草剂筛选标记Bar基因的载体的构建中，DNA片段2和DNA片段3通过同源重组插入干扰载体的多克隆位点处得到适合除草剂筛选标记Bar基因的载体，或DNA片段2和DNA片段3通过双酶切与经过同样酶切处理的干扰载体连接得到适合除草剂筛选标记Bar基因的载体。